文档介绍：医学微生物学与免疫学实验                 实验目的和要求一、实验前务必做好预习,明确实验目的、内容及理论依据等,避免或减少错误的发生,以保证实验在预期内完成。二、实验操作严格按要求进行,严防污染和感染。三、对示教实验联系理论认真观察。对光镜下标本不得擅自挪动视野,其他示教标本看后必放回原处。对录像教学应作重点、简要的笔记。四、客观真实地记录实验结果并进行分析,若与理论不符,要加以分析讨论,找出原因,必要时重复实验。五、在规定时间内完成实验报告,报告要求字迹清楚,说明问题简单扼要。                   。,按规定就坐。,不得高声谈笑、乱动物品或随便走动。、进食、饮水或用嘴湿润铅笔和标签等,也不要用手搔抓抚摸机体。,或病原菌污染衣物、卓(地)面等事故,应立即报告指导老师,进行紧急处理。、试管、吸管等,用后应随即投放盛有消毒剂的指定容器内,不得放在桌上,也不可在水池中冲洗。,按实验要求应及时清理实验物品,清扫卫生;离开实验室时,消毒洗手后离开实验室;对白大衣经常清洗消毒。                  油镜的使用和维护目的:掌握油镜的使用与维护,熟悉油镜的使用原理。材料:显微镜,拭镜纸,液体石蜡油,二甲苯原理:油镜的透镜极小,工作焦距最短,光线通过玻璃和空气,由于介质密度不同发生折射,射入镜筒的光线极少,视野暗,物象不清晰。如在玻片与镜头(透镜)之间加上折光率和玻片(n=)相近的香柏油(n=)就可减少光线的折射,加强视野的亮度,获得清晰的物象。步骤:。识别油镜头:标有100×、OIL、HI等字样。,用低倍镜对光,打开光圈,调节聚光镜的位置,使视野光线充足。,转动粗螺旋,使油镜头缓缓下降,用眼从侧面观察,直到油镜头浸入油中接近玻片为止。,同时徐徐转动粗螺旋提升,见模糊物象后再用细螺旋调节,直到见到清晰物象为止。,粗螺旋提高镜头,取下标本片,油镜头使用后立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干,可在擦镜纸上滴少许二甲苯擦拭,并立即用另一擦镜纸擦去二甲苯,因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜头脱落。“八”字,调低聚光器,对号送入柜子内存放。                     革兰染色目的:掌握革兰染色的原理及操作。材料:干净玻片,接种环,葡萄球菌和大肠杆菌18-24h培养后的混合菌液,酒精灯,一套革兰染液原理:主要为细胞壁结构的差异。G+三维肽聚糖结构的交联度大,通透性低,脂质少或无,酒精作用使孔径缩小;而G-肽聚糖为二维疏松结构,薄,外膜含大量脂质,易被酒精溶解,使细胞壁通透性增高,结晶紫-碘复合物被酒精溶解而脱色。步骤:(1)涂片:无菌操作。取一接种环混合细菌悬液,涂布成直径约1cm的涂片,涂片应薄而均匀。(2)干燥:涂片最好在室温中自然干燥。必要时可将标本面向上,放在酒精灯上方微火处干燥。(3)固定:标本面向上,在酒精灯火焰外焰按钟摆的速度来回通过3次,放置待冷后染色。固定的目的是杀死细菌,使细菌与玻片黏附较牢固。菌体蛋白质变性后,提高与染料的亲和力。(1)初染:滴加结晶紫染液1-2滴于涂片上,1min钟后用自来水缓缓冲洗。(2)媒染:滴加碘液1-2滴,1min后用自来水缓缓冲洗。(3)脱色:加95%酒精数滴,摆动玻片使酒精与细菌充分接触,约20-30s后,立即用自来水缓缓冲洗。(4)复染:滴加稀释碳酸品红液,30-60s后,自来水缓缓冲洗。用吸水纸吸干后,用油镜观察。镜检后,载片放入消毒缸。                  细菌特殊结构的观察目的:观察并掌握细菌的形态及特殊结构。材料:细菌鞭毛、芽孢、荚膜的标本片;革兰阳性菌、革兰阴性菌染色标本片示教:革兰阳性菌:葡萄球菌,紫色革兰阴性菌:大肠杆菌,红色细菌鞭毛细菌芽孢细菌荚膜                     细菌的分布目的:了解细菌在自然界中的分布情况。材料:普通琼脂平板培养基、血平板、镊子、无菌棉拭子、革兰染液。操作步骤:(1)采用沉降法:取普通琼脂平板培养基1只,任意置一处,启盖约15分钟,再盖上,37℃培养24小时,观察有无细菌生长。 (2)结果判定:培养基表面可见多种大小、形态不一的菌落。(1)采用涂抹法:先在平板底面用记号笔分成两区,作标记,将未消毒的手指在平板的1/2处表面轻轻涂抹划线,然后用碘酒、乙醇擦拭手指皮肤,用消毒后的手指在平板另一1/