[ 应用纪要 ].pdf

文档介绍：[应用纪要]
IgG中G0F及G1F糖肽的MS/MS数据特点分析
贾伟
沃特世科技(上海)有限公司实验中心
关键词:
免疫球蛋白G (IgG) 糖基化 G0F G1F MS/MS Q-ToFTM
引言
IgG作为最为常见的抗体药物种类,IgG的结构分析工作是新药研发、质量控制的基础与关键。而IgG中糖基化的构型对其药效往
往起到至关重要的作用。经典方法中,通过肽-N糖苷酶F(PNGase F)处理IgG,并采用 2-AB等试剂衍生后,可以对其N-链的糖型结构
进行分析。而随着质谱成为蛋白药物结构分析的必须手段,采用MS/MS串联质谱技术,直接分析 IgG的蛋白酶解产物中的N-糖肽,
可以更加高效地获得其准确的结构信息。本文探讨了IgG中最常见的糖基化序列EEQYNSTYR的两种糖基化形式(G0F与G1F)的质谱
行为规律,旨在为免疫球蛋白抗体类药物的糖型结构的质谱分析提供参考依据。
实验方法
使用反相UPLC® Xevo® G2 Q-ToF,采集 IgG胰蛋白酶切片段的EEQYNSTYR的G0F与G1F两种形式糖肽的MS/MS质谱数据(采集2+离
子:/z) 。使用 20V-40V、30V-50V、40V-60V、50V-70V、60V-80V等5种不同的MS/MS碰撞能量(Collision Energy) ,以发
现最优化二级质谱条件。二级质谱数据使用MaxEntTM 3软件去卷积后进行碎片离子确认。
结果与讨论
UPLC Xevo G2 Q-ToF卓越的性能为得到高质量的N-糖肽二级质谱数据提供了保证。在数据中可以发现完整的糖Y离子碎片系列,以
及丰富的多肽b、y离子碎片。
一、G0F糖肽分析
以下5张图谱为不同碰撞能量下,糖型为 G0F的N-糖肽二级质谱去卷积后匹配图。
[应用纪要]
[应用纪要]
通过观察可以发现:
-40V碰撞能量,不能使此糖肽充分碎裂,其母离子信号仍为最强;
-50V碰撞能量下,获得了完整的糖链的Y离子碎片,且强度较为均匀,为糖型序列准确地解读提供了完整、充分的信息;
碰撞能量由低到高的递增过程中,高质量端的糖Y碎片离子强度逐渐降低,而糖诊断离子(如、)强度逐渐增
3. C8H13NO5+ C14H23NO10+
强;
-70V与60V-80V碰撞能量下,都可得到较丰富的肽段b、y离子碎片,但 50V-70V条件下的b、y离子信号更为清晰。
二、G1F糖肽分析
以下5张图谱为不同碰撞能量下,糖型为 G1F的N-糖肽二级质谱去卷积后匹配图。
[应用纪要]
G1F糖肽具有G0F糖肽的前三个碎片特点,但 G1F糖肽需要在60V-80V碰撞能量下,获得丰富的肽段碎片。对照两者图谱特点可以发
现:y9、y1、y4、y2、y3、b3为易出现的EEQYNSTYR糖肽的b、y离子