动物用饲料添加剂的制作方法.docx

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专利名称::动物用饲料添加剂的制作方法
技术领域:
:本发明涉及具有产生酸性酶的能力的曲霉属菌及含有杆菌属细菌的动物用饲料添加剂。
背景技术:
:家畜或宠物(以下称为动物)等的饲料虽然进行粉碎等的加工,但由于一般不进行加热处理等,因此存在消化吸收率变低、饲料效率差的问题。而且,最近作为人类的疾病已知的溃疡性结肠炎或克隆病等的炎症性肠病在动物中也见报告,存在引起腹泻等的症状的问题。此外,也已知这样的炎症性肠病会降低饲料的吸收或妨碍健康肥育。作为引起动物的肠内感染症的病原菌,已知的有病原性大肠菌、沙门氏菌属细菌、梭菌属细菌、弯形菌属细菌等。已知这样的病原菌在异常增殖时会产生***(肠***、细胞***),在肠管粘膜引起疾病,引起软便或剧烈的腹泻等。此外,球虫是寄生于鸡、猪、牛等的肠管内的原虫,感染时会引起腹泻、食欲不振等。为预防,治疗这样的炎症性肠病而使用抗生素,但存在出现耐药性菌等的问题。近年来,为了改善肠内菌群的平衡、抑制肠内病原菌的增殖而使用益生菌的技术正受到注目(专利文献l、专利文献2)。但是,%脱氧胆酸的浓度下死亡或在pH4以下中死亡的居多,除了统称为大肠菌群的细菌以外,以在胆汁酸中在对微生物具有强烈的抗菌性的脱氧胆酸的存在下不能生存的菌种居多。所以,人们探求在动物的消化管内也不死亡、给宿主带来有利的效果的菌种。另一方面,报告
有通过将动物用饲料在其加工阶段用酶或酶生产菌处理,预先某种程度分解好,由此减轻动物的胃肠负担的技术等有助于消化器系统的疾病的预防或改善(专利文献3)。此外,已知有一种方法,用曲霉菌使鱼粉以低水分发酵来得到含有高浓度的蛋白酶、脂肪酶等的鱼用鱼粉发酵饲料(专利文献4)。然而,这样的技术中存在一个问题,即提高饲料中的水分含量进行饲料的成分分解之后,需要进行干燥并产品化的繁杂的工序。为成分分解而提高水分含量的饲料甚至还存在容易产生***菌或霉等,难以维护品质等的问题。此外,虽报告有一种将曲霉菌向动物经口投与来改良动物的翼便的方法,但未对抑制在动物肠内引起炎症等的有毒细菌的增殖或促进体重增加这样的用途进行过研究,也不知以使曲霉菌产生酸性酶的形态投与动物的情况(专利文献5)。此外,记载有一种方法,在甲壳类的甲壳粉碎物中加入并混合发酵营养源,在其中接种选自黑曲霉、米曲霉、枯草杆菌、地衣形芽胞杆菌的1种或2种以上,并使几丁质或壳聚糖分解得到发酵物并给予动物(专利文献6)。用该方法得到的动物的成长促进效果一部分得到承认,但未对抑制动物肠内的病原菌的增殖、预防,治疗肠内感染症进行过研究,这样的效果也未得到承认。此外,混合两种以上的
微生物并投与动物这一情况,实际上并未被研究。此外,报告有枯草杆菌具有对病原性大肠杆菌等的病原菌的抗菌活性(专利文献7、8),但对经口投与动物没有研究。此外,已知枯草杆菌DB9011具有黄曲霉***分解性,阻碍真菌的发育,研究了被添加到饲料中的情况(专利文献9)。然而,迄今为止尚未对组合枯草杆菌和其他系统的微生物并使动物摄取一事进行研究。专利文献1:日本专利特表2005-507670号公报专利文献2:日本专利特表2004-523241号公报专利文献3:日本专利特开2004-141147号公报专利文献4:日本专利特表平6-319464号公报专利文献5:日本专利特开平11-171674号公报专利文献6:日本专利特开2002-238466号公报专利文献7:日本专利特开平11-332555号公报专利文献8:日本专利特开平11-285378号公报专利文献9:日本专利第3040234号公报非专禾U文献1:,MadhusudanG..Soni,andLoanaG..Carabin(2001)RegulatoryToxicologyandPharmacology33,80-101非专利文献2:,WalterKocholaty,RenateJunowicz-Kocholaty,andAlbertKelner(1945),579-58
发明内容本发明的课题在于提供用于辅助动物的消化活动、提高饲料效率的安全且简便的手段。具体地讲,课题在于提供这样一种手段,通过抑制动物肠内的病原菌或球虫的增殖来预防,改善肠内感染症,并实现动物的体重增加。本发明人为解决上述课题进行专心研究的结果,发现酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉及米曲霉产生酸性酶尤其是产生淀粉酶的能力优异、
这些菌具有对引起肠内感染症的病原菌的抗菌活性以及具有对于球虫的杀原虫活性、以及这些作为益生菌发挥功能。此外,发现这些菌的酸性酶产生能力在以糙米为营养源培养时极其优异。而且,发现通过将这些菌体和由菌体产生的酸性酶组合并与饲料一同使动物摄取,由此促进消化、预防,改善肠内感染症、有助于动物的体重增加。此外,发现枯草杆菌即使与上述曲霉属菌及该菌所产生的酸性酶共存,也不妨碍其增殖。而且,发现通过将曲霉属细菌及该菌所产生的酸性酶、以及枯草杆菌组合并使动物摄取,可得到更优异的成长促进效果、肠内感染症的预防-改善效果,以至完成本发明。艮P,本发明如下所述。(1)一种动物用饲料添加剂,含有选自酱油曲霉(Aspergillussojae)、溜曲霉(Aspergillustamarii)、臭曲霉(Aspergillusfoetidus)、黑曲霉(Aspergillusniger)及米曲霉(Aspergillusoryzae)的至少一种的曲霉属菌、含有这些菌所产生的酸性酶的培养物以及枯草杆菌(Bacillussubtilis),其特征在于,每g饲料添加剂的酸性酶活性的总合为120U以上,~2xl09CFU/g。(2)如(1)记载的动物用饲料添加剂,其特征在于,所述酸性酶含有酸性淀粉酶,每
g词料添加剂的酸性淀粉酶活性为1U以上。(3)如(1)或(2)记载的动物用饲料添加剂,其特征在于,所述曲霉属菌具有对引起动物肠内感染症的病原菌的抗菌活性及/或对于球虫的杀原虫活性。(4)如(1)~(3)的任一项记载的动物用饲料添加剂,所述曲霉属菌是酱油曲霉及/或米曲霉。(5)如(1)~(4)的任一项记载的动物用饲料添加剂,米曲霉是IK-05074株(FERMBP-10622)及/或它们的变异株,其特征在于,是具有与所述菌株相同的酸性酶产生能力的菌株。(6)如(1)~(5)的任一项记载的动物用饲料添加剂,所述培养物含有植物性营养源。(7)如(6)所记载的动物用饲料添加剂,所述植物性营养源是糙米。(8)如(1)~(7)的任一项记载的动物用饲料添加剂,其特征在于,枯草杆菌是DB9011株(FERMBP-3418)及/或它们的变异株。(9)如(1)~(8)的任一项记载的动物用饲料添加剂,其特征在于,用于成长促进。(10)如(1)~(8)的任一项记载的动物用词料添加剂,其特征在于,用于肠内感染症的预防'改善。(11)一种饲料,~%的(1)~(10)的任一项记载的动物用饲料添加剂。(12)—种饲料的制造方法,其特征在于,包括以下工序,在含有用于曲霉属菌的增殖的营养源的固体培养基中培养选自酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉及米曲霉的至少一种的曲霉属菌而得到培养物,含有该得到的培养物至每kg饲料的酸性酶活性的总和在
12U以上的工序、~2xl01QCFU/kg的工序。(13)—种动物的饲养方法,其特征在于,使动物摄取(11)所记载的词料。具体实施例方式本发明的动物用饲料添加剂的特征为,含有选自酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉及米曲霉的至少一种的曲霉属菌、含有这些菌所产生的酸性酶的培养物、以及枯草杆菌(Bacillussubtilis)细菌。本发明的动物用饲料添加剂中含有的酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉及米曲霉在该
技术领域:
中根据通常用于曲霉菌的种类鉴别的方法分类时,是分别被分类在上述这些种中的菌。菌种的鉴别,也可以参照如",TheJournalofGeneralandAppliedMicrobiology,17,-309,(1971)"、"村上英也,日本酿造协会志,第74巻,第12号,,(1979),,、"Nikkuni,S.,etal,TheJournalofGeneralandAppliedMicrobiology,44,-230,(1998)"等。酱油曲霉是见于土壤、曲等中的丝状不完全菌的一种,是用于酱油、酱的酿造的菌。在本发明的动物用饲料添加剂中,只要是具有产生以下详述的酸性酶中至少一种、优选具有产生酸性淀粉酶的能力的、在动物摄食这一点上安全的酱油曲霉,则可以无特别限制地使用。在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用市售的菌株,作为这种菌可以优选使用酱油曲霉AOK210株(株式会社秋田今野商店
)。溜曲霉是见于土壤、曲、食品等中的丝状不完全菌的一种,是用于酱油、酱的酿造的菌。在本发明的动物用饲料添加剂中,只要是具有产生以下详述的酸性酶中至少一种、优选具有产生酸性淀粉酶的能力的、在动物摄食这一点上安全的溜曲霉,则可以无特别限制地使用。在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用市售的菌株,作为这种菌可以优选使用溜曲霉AOK43株(株式会社秋田今野商店)。臭曲霉是见于土壤、曲、谷物糟粕等中的丝状不完全菌的一种,是用于酱、酱油的酿造的菌。在本发明的动物用饲料添加剂中,只要是具有产生以下详述的酸性酶中至少一种、优选具有产生酸性淀粉酶的能力的、在动物摄食这一点上安全的臭曲霉,则可以无特别限制地使用。在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用市售的菌株,作为这种菌可以优选使用臭曲霉AOKN4586株(株式会社秋田今野商店)。黑曲霉是见于土壤、曲、谷物糟粕等中的丝状不完全菌的一种,是在酒类制造、食品加工、糖的制造或医药的制造等各种场合中使用的菌。在本发明的动物用饲料添加剂中,只要是具有产生以下详述的酸性酶中至少一种、优选具有产生酸性淀粉酶的能力的、在动物摄食这一点上安全的黑曲霉,则可以无特别限制地使用。在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用市售的菌株,作为这种菌可以优选使用黑曲霉AOKB650株(株式会社秋田今野商店)。此外,也可以使用AOK210株、
AOK43株、AOKN4586株或AOKB650株的变异株。变异株可以使这些菌株自然变异、或可以从用化学变异剂、或紫外线等进行变异处理而得到的菌株中挑选并得到分别与AOK210株、AOK43株、AOKN4586株或AOKB650株一样地具有产生酸性酶的能力的菌株。此外,还优选使用,除了产生酸性酶的能力之外进一步具有与上述菌株相同抗菌活性、杀原虫活性、耐胆汁酸性、耐酸性的至少一个的上述菌株的变异株。此外,进一步优选使用上述以外的菌学性质也和AOK210株、AOK43株、AOKN4586株或AOKB650株一样的变异株。米曲霉是见于土壤、曲等中的丝状不完全菌的一种,是用于酱油、酱的酿造的菌。在本发明的动物用饲料添加剂中,只要是具有产生以下详述的酸性酶中至少一种、优选具有产生酸性淀粉酶的能力的、在动物摄食这一点上安全的米曲霉,则可以无特别限制地使用。在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用市售的菌株,作为这种菌可以优选使用米曲霉IK-05074株。IK-05074株是自各种发酵食品中分离得到的株,于平成18年2月15日以保藏编号FERMP-20798保存于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(〒305-8566,日本国茨城县筑波巿东1丁目1番地1中央第6)中,于平成18年6月20日根据布达佩斯条约移交国际保藏,所受保藏编号为FERMBP-10622。IK-05074株的菌学性质如下。(1)菌落的性状(Czapek-DoX琼脂培养基(25。C下培养7天))大小为直径
5060mm、颜色从黄到绿、随着时间的经过变化成带有褐色的颜色。菌丝体不明显,背面是无色。(2)形态分生孢子柄薄壁厚壁、滑面稍微粗糙面、直径20nm以下、长度2mm以下、顶囊(顶O5)为直径405(Him、8(Him以下的球形。梗基在大部分大的分生孢子柄中存在,长度12^m以下。瓶梗安瓿型、长度为812pm、具有短的颈部。分生孢子直径5~6|um的球形、颜色从黄至绿,表面滑面微细的粗糙面。根据以上,推定IK-05074株归属于米曲霉(Aspergillusoryzae)。此外,在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以使用IK-05074株的变异株。IK-05074株的变异株可以是使IK-05074株自然变异、或者从用化学变异剂或紫外线等进行变异处理而得到的菌株中挑选得到与IK-05074株一样地具有产生酸性酶的能力的菌株。此外,也优选除了产生酸性酶的能力之外进一步具有与IK-05074株相同的抗菌活性、杀原虫活性、耐胆汁酸性、耐酸性的至少一个的IK-05074株的变异株。此外,进一步优选使用上述以外的菌学性质也和IK-05074株一样的变异株。此外,在本发明的动物用饲料添加剂中,也可以在例如从土壤、曲、食品、谷物等中离析的酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉、米曲霉中将具备产生酸性酶的能力的菌株分离来使用。产生酸性酶的能力是指在培养菌体而得到的培养物中以可以检测到酸性酶活性的程度产生酸性酶。培养物的酸性酶活性的测定可以按照常规方法进行。本发明的动物用饲料添加剂所含有的酸性酶优选上述菌所产生的消化酶,只要是在胃肠内的酸性条件下不失活并具有活性的酶,则无特别限制,尤其优选具有
~。例如,可以举例如酸性的a-淀粉酶、葡糖淀粉酶、高峰淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、核糖核酸酶、核酸酶、木聚糖酶、果胶酶、脂肪酶等。本发明的动物用饲料添加剂含有这些当中的一种或两种以上。这其中尤其优选含有分解家畜的饲料成分中主要成分之一的淀粉的酸性淀粉酶。本发明的动物用饲料添加剂所含有的酸性淀粉酶只要是水解淀粉的酸性酶则无特别限制,可举例如a-淀粉酶、P-淀粉酶、葡糖淀粉酶等。这其中可以优选举例为在3附近具有最适pH的耐酸性a-淀粉酶。本发明的动物用饲料添加剂只要含有酱油曲霉、溜曲霉、臭曲霉、黑曲霉、米曲霉所产生的酸性酶中的至少一种即可,但也可以进一步含有其他菌种或其他生物种来源的酶。本发明的动物用饲料添加剂的酸性酶活性只要使之在以下范围内即可。每g动物用饲料添加剂的酸性酶活性的总和在120U以上,优选170U以上,进一步优选220U以上,进一步优选2705400U。酸性酶活性的总和优选是酸性淀粉酶活性、酸性蛋白酶活性及酸性羧基多肽酶活性的总和。此外,每g动物用饲料添加剂的酸性酶淀粉酶活性优选1U以上,进一步优选5U以上,进一步优选10U以上,再优选20400U。此外,每g动物用饲料添加剂的酸性蛋白酶和酸性羧基多肽酶活性的总和优选