文档介绍：实验四 PCR扩增基因特异片段
一、实验目的
1、学会PCR仪的使用方法。
2、掌握PCR反应的实验技术。
二、实验原理
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称PCR。聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DN***段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,。
GLBI蛋白是玉米胚中含量最丰富的蛋白质之一,其编码基因glb1位于第一染色体长臂,基因表达仅限于种子组织。该蛋白对于幼苗生长与存活并非必需。本实验扩增glb1基因部分序列,全长1200bp左右。
真核生物基因组中编码核糖体的基因包括28S rDNA、5S rDNA、18S rDNA 4 种,它们在染色体上头尾相连、串联排列,相互之间由间隔区分隔。其中18S、
rDNA基因组成一个转录单元,三者高度保守,适合于较高等级水平的生物群体间的系统分析, 其间的间隔区为内转录间隔区( Internal Transcribed Spacer, ITS),本实验扩增榨菜黑斑病ITS序列,序列全
长500kb左右。
三、实验仪器及药品耗材
1、主要仪器:移液器、振荡器、PCR仪、电子天平、量筒、微波炉、电泳仪、水平电泳槽和凝胶成像系统等。
2、主要药品及耗材:一次性手套、PCR板、移液器吸头、无菌水、2×PCR 混合酶(Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂组成的混合液)、液体石蜡、琼脂糖、×TBE缓冲液、Goldview染料、DNA Marker 2000和溴酚蓝等。
四、实验步骤
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