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广西植物:—年月
根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素
贺红,林小桦,张桂芳,徐鸿华
广州中医药大学中药学院,广东广州
摘要:以巴戟天带节茎为材料,研究了根癌农杆菌对巴戟天遗传转化的影响因素。结果表明:外植体感染前
先进行预培养,对转化有一定促进作用;外植体与农杆菌共培养时间以为宜;乙酰丁香酮能提高转化效
率,抗性芽分化率可达. 夕植体与农杆菌共培养后延迟选择,抗性芽分化率有所提高;硝酸银能抑制
外植体表面农杆菌的生长,提高阳性芽的比例,硝酸银浓度/时,阳性芽比例最高. 。
关键词:巴戟天;农杆菌;遗传转化
中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:———
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巴戟天为茜草科藤试验以巴戟天带节茎为材料,对于影响转化的一些
本植物,以肉质根人药,具有补肾壮阳、强筋骨、祛风因素作了系统的研究,初步建立了一套根癌农杆菌
湿的功效《中国药典》,。巴戟天为广东道地介导的外源基因转人方法。
药材,四大南药之一徐鸿华,。目前影响巴戟
天产量和品质的主要因素之一是病虫的危害,解决材料与方法
这一问题的根本途径是抗病虫新品种的选育。随着
现代生物技术的发展,
转移有价值的目的基因成为可能,目前在重要农作巴戟天来源于国家
物及经济作物方面有重大突破许智宏,;同新科技部巴戟天规范化种植德庆基地。采取
甫,,但在药用植物方面的研究较少报道。本巴戟天植株的顶芽或侧芽,消毒培养无菌苗,当苗长
收稿日期:——修订日期:——
基金项目:国家自然科学基金项目;广东省自然科学基金项目。
作者简介:贺红一,女,江西永新人,博士,研究员,从事中药资源学及中药生物技术的研究工作。
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广西植物卷
至一定大小时,切取约长的带节茎,用作转化表预培养对农杆菌转化后抗性芽分化的影响
外植体。
—
.离体再生培养

在/培养基上诱导出芽,待芽
长到~时,置于生根培养基.

.
. : ‘
~ ./诱导生根贺红等,。⋯⋯:‘: ⋯‘
.细菌菌株及培养
工程农杆菌
的质粒上插入了、Ⅱ
基因。农杆菌划线培养在含有/卡那霉素
的培养基上,℃条件下黑暗培养,待长出菌
表共培养时间对抗性芽分化的影响
落后,挑取单菌落接于液体培养基中,℃条
件下振荡~,达到菌对数生长期,.~
左右,培养物即可用于感染贺红等,。
.外植体的转化
将巴戟天带节茎切段浸入到准备好的菌液中
,随后转到无菌滤纸上以吸掉多余的菌液,将
外植体接种于不含卡那霉素,及头
孢霉素,的培养基上共培养
后,再转到含/和/的选择表示基因瞬时表达弱; 表示基因瞬时表达中
等;表示基因瞬时表达强。
培养基上,诱导抗性芽的产生。乙酰丁香酮—“”“”—
,处理中,在用于感染的农杆菌悬液及共“”
培养基中分别加入相应浓度的。硝酸银.
处理中,在选择培养基中添加不同浓度的。.共培养时间对转化的影响
.活性检测外植