文档介绍：植物组培实验二
植物组培实验报告
实验二、培养基的配制及灭菌
一、实验目的
1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。
2、了解培养基的成分、类型及特点。
3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。
二、实验原理
植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作,对场地有一定的要求,需配备必要的仪器设备和器皿、器械,还必须熟练掌握每个环节的操作技术。植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽,其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。
三、实验内容
1、培养基的成分
以MS培养为例,其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
作用:原生质体的组成成分,代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中。配制:培养基母液时要用蒸馏水:配培养基时可用自来水。但在
少量研究上尽量用蒸馏水。
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大量元素,,有N、P、K、Ca、Mg、S等。其作用是:
(1)N
功能:是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分,是生命结构和功能物质不可缺少的。
供应形式:含有NO3-N又含NH4-N。NH4-N对植物生长较为有利。在制备培养基时以这两种形式供应。供应的物质有KNO3、、NH4NO3等。有时,也添加氨基酸。
(2)P
功能:是磷脂的主要成分,而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。磷也是核酸、ATP、辅酶等的组成成分。组织培养中,磷不仅增加养分、提供能量,而且也促进对N的吸收,增加蛋白质在植物体中的积累。
供应形式:常用的物质有KH2PO4或NaH2PO4等。
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(3)K
功能:K对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系,它具有活化酶的作用。K增加时,蛋白质合成增加,维管束、纤维组织发达,对胚的分化有促进作用。但浓度不易过大,一般为1~3mg/l为好。
供应形式:制备培养基时,常以KCl、KNO3 等盐类提供。
(4) Mg、S和Ca
功能: Mg是叶绿素的组成成分,又是激酶的活化剂;S是含硫氨基酸所构成蛋白质的组成成分。Ca 是构成细胞壁的一种成分,Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用,
供应形式:以MgSO4·7H2O和CaCl2·2H2O提供。
(5)微量元素
种类:, Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。
功能:铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时,它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽3
的分化和幼苗转绿有促进作用。B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co等,也是植物组织培养中不可缺少的元素,缺少这些物质会导致生长,发育异常现象。
供应形式:,易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀,故用Fe SO4·7H2O和 Na2-EDTA结合成螯合物使用。当某些营养元素供应不足时,愈伤组织表现出一定的缺素症状。如缺氮,会表现出一种花色素苷的颜色,不能形成导管;缺铁,细胞停止分裂;缺硫,表现出非常明显的褪绿;缺锰或钼,则影响细胞的伸长。
(1)碳水化合物
供应形式:最常用蔗糖,葡萄糖和果糖也较好,麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖也有应用。
使用浓度:2~3%,常用3%,即配制1升培养基称取30g蔗糖,%,但在胚培养时采用4~15%的高浓度,因蔗糖对胚状体的发育起重要作用。
用量注意:不同糖类对生长的影响不同。以葡萄糖效果最好,果糖和蔗糖相当,麦芽糖差一些;不同植物不同组织的糖类需要量也不同, 代用品:在大规模生产时,可用食用的绵白糖代替。
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(2)维生素
种类:主要有VB1 (盐酸硫***素)、VB6(盐酸吡哆醇)、VPP(烟酸)、VC(抗坏血酸) 、有时还使用生物素、叶酸、VB2等。~。有时用量较高。
功能:以各种辅酶的形式参与多种代谢活动,促进生长、分化作用。VB1对愈伤组织的产生和生活力有重要作用,VB6能促进根的生长,VPP与植物代谢和胚的发育有一定关系。VC有防止组织变褐的作用。
(3)肌醇又叫环己六醇,
功能:参与构建细胞壁。由磷酸葡萄糖转化而来,进一步生成果胶物质。
肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸,植酸与钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁,植酸可进一步形成磷脂,参与细胞膜的构建。
能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。促进组织和细胞的繁殖、分化。
使用浓度:一般为100mg/l,
(4)氨基酸
功能:作为有机氮