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管状蠕虫半乳糖凝集素及其制备方法
管状蠕虫半乳糖凝集素及其制备方法,涉及管状蠕虫半乳糖凝集素基因的核苷酸序列以及其所编码的氨基酸序列。通过提取管状蠕虫Ridgeia?piscesae的总RNA,进行逆转录,通过引物扩增和鉴定了半乳糖凝集素基因rpgal。通过pET-His构建了重组原核表达载体,在大肠杆菌BL21中进行重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度高、活力好,为该蛋白的实际应用提供了基础。通过同源重组表达半乳糖凝集素,可以克服分离纯化过程复杂繁琐、产量低等不足,为该蛋白能广泛应用于生物、食品、医药、农业等研究领域奠定基础。
【专利说明】管状蠕虫半乳糖凝集素及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及管状蠕虫(Ridgeiapiscesae)半乳糖凝集素基因的核苷酸序列以及其所编码的氨基酸序列,尤其是涉及管状蠕虫(Ridgeiapiscesae)半乳糖凝集素及其制备方法。
【背景技术】
[0002]凝集素是自然界广泛存在的一类选择性识别糖结构并与其非共价结合的蛋白质,根据来源可分为动物凝集素、植物凝集素和微生物凝集素。半乳糖凝集素(Galectin)是动物凝集素家族中的一员,存在于多种动物体内,参与细胞粘附、生长
调节和免疫反应等多种生物学过程。到目前为止,已在多种脊椎、无脊椎动物中发现多个半乳糖凝集素家族成员。从哺乳动物体内克隆得到的共14个成员,按结构不同分为3类:单一型、串联重复型、嵌合型。这些成员在结构上均具有保守的糖识别结构域(CRD),并对(6-半乳糖苷有特殊亲和力,在机体的多种生理和病理过程中发挥重要作用。研究发现,从海洋无脊椎动物中发现的多种凝集素,它们不仅作为一种非特异性识别因子,识别自身和异己成分;还具有凝集细胞,抑制肿瘤细胞增殖,抑制血小板凝集,细胞毒性,催化活性等作用。
[0003]深海热液区的环境特征是:黑暗、高压、氧浓度低、寡营养以及温度、盐度、pH值等急剧变化。在如此恶劣的生活环境下,使得以管状蠕虫为代表的热液区生物具备了适应极端环境的特殊机制(如耐盐性、耐高温、耐高压和高渗透性等)。独特的适应性机制,使其在生理代谢过程中形成了各种生物活性物质,与陆地资源相比更具特殊性,是极具潜在应用价值的资源。
【发明内容】
[0004]本发明的第一个目的是提供管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因;
[0005]本发明的第二个目的是提供管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素蛋白序列;
[0006]本发明的第三个目的是提供管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素;
[0007]本发明的第四个目的是提供管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的制备方法。
[0008]本发明的第五个目的是提供管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素RpGal在生物学活性分析中的应用。
[0009]所述管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因,其编码管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的核苷酸序列,记作rpgal。
[0010]所述管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因rpgal的分子类型为DNA,序列特征:长度为1092bp,类型为核酸,链性为双链,拓扑结构为线性,所述管状蠕虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因rpgal的序列如下所示,:
[0011]IATGATGAACGCACCAGGAATGGCTGTCAGACCAGAAACCGTTATCATAAACCCACCAATT
【权利要求】
,其特征在于编码管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的核苷酸序列,记作rpgal。
,其特征在于所述管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因
rpgal的分子类型为DNA,序列特征:长度为1092bp,类型为核酸,链性为双链,拓扑结构为线性,所述管状蠕虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素基因rpgal的序列如下所示,:
,其特征在于其核苷酸序列采用以下方法获得:提取管状螺虫Ridgeiapiscesae的RNA,并将RNA反转录成cDNA,进一步以cDNA为模板,;,然后进行原核表达载体构建获得重组表达蛋白。
,其特征在于包括具有凝集活性的管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素RPGAL。
,其特征在于所述管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素RPGAL的分子类型为蛋白质,序列特征:长度为363aa,类型为氨基酸,所述管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素RPGAL的序列如下所示,:
,;、缺失或添加而形成的,
所示的氨基酸序列相似功能的多肽。
,其特征在于包括以下步骤:一个管状螺虫Ridgeiapiscesae总RNA的提取的步骤;一个管状螺虫RidgeiapiscesaecDNA反转录的步骤;一个管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的PCR扩增和序列分析的步骤;一个管状螺虫Ridgeiapiscesae半乳糖凝集素的重组表达的步骤。
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