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专利名称:用作恶性的、激素-敏感的前列腺癌的标志物的磷酸二酯酶4d7的制作方法
技术领域:
本发明涉及用作恶性的、激素-敏感的前列腺癌的标志物的磷酸二酯酶4D7(PDE4D7),其中当对比恶性的、激素-敏感的前列腺癌组织中的表达和正常组织或良性前列腺肿瘤组织中的表达时,所述标志物的表达增加,以及PDE4D7作为恶性的、激素-敏感的前列腺癌的诊断标志物的应用。本发明也涉及用于诊断、检测、监测或预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌的组合物,对应的检测方法,辨别良性和恶性激素-敏感的前列腺癌的方法,数据获取方法,以及对应的免疫测定。本发明也涉及鉴别个体的恶性的、激素-敏感的前列腺癌的适格(eligibility)的方法,以及用于分级(stratify)具有这样的前列腺癌的个体的免疫测定。本发明另外预见到药物组合物和它们用于治疗恶性的、激素-敏感的前列腺癌的应用。本发明也涉及对PDE4D7蛋白特异性的抗体用于检测、诊断、监测或预测癌症、或用于治疗癌症的应用。
背景技术:
癌症是一类疾病,其中一群细胞表现出失控的生长、侵入,并有时表现出转移。癌症的这
3种恶性性质将它们与良性肿瘤区别开,所述良性肿瘤是自我限制的,不会侵入或转移。在发达国家,在男性中,3种最常诊断出的癌症是前列腺癌、肺癌和结直肠癌。具体地,在欧洲男性中,前列腺癌是最常见的恶性肿瘤。在2002年,在欧洲,据估计有225,000位男性被新诊断出前列腺癌,约83,000人死于该病。已经将某些磷酸二酯酶与癌症发展相关联。例如,已经证实,磷酸二酯酶PDE7与慢性淋巴细胞白血病有关。然而,对于许多癌症类型或癌症进展形式,没有可利用的适当标志物分子。例如,传统上通过前列腺-特异性的抗原(PSA)的血清水平,诊断前列腺癌。但是,PSA不是前列腺癌-特异性的,且可以在其它情况下升高,导致大量假阳性(在接受活组织检查的、具有升高的PSA水平的男性中,约70%没有发现癌症)。此外,存在不可预测数目的假阴性,他们以后在有“正常”PSA检验存在下发展成前列腺癌。因此,需要提供新的且有效的、替代性的诊断方法,其用于检测、监测和预测前列腺癌,尤其是恶性的、激素-敏感的前列腺癌。
发明内容
本发明满足了该需要,并提供了装置和方法,它们允许诊断和检测前列腺癌,尤其是恶性的、激素-敏感的前列腺癌。上述目的通过用作恶性的、激素-敏感的前列腺癌的标志物的磷酸二酯酶4D7(PDE4D7)来实现,其中当对比恶性的、激素
-敏感的前列腺癌组织中的表达和正常组织或良性前列腺肿瘤组织中的表达时,所述标志物的表达增加。发明人证实,磷酸二酯酶4D7在前列腺癌细胞或细胞系中被向上调节。因而,PDE4D7被视作前列腺癌预测的生物标志物,和用于分级前列腺癌监督方案以及预测和监测前列腺癌进展的判断工具。具体地,发明人证实,PDE4D7具体地在人-衍生的恶性的、激素-敏感的前列腺癌细胞或细胞系以及对应的人组织样品中被向上调节。因而,基于用作前列腺癌标志物的PDE4D7的诊断方法和应用可以有利地用于(i)检测和诊断恶性的、激素-敏感的前列腺癌,(ii)预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌,(iii)监测癌症向恶性的、激素-敏感的前列腺癌形式的进展,和(iv)区分良性的和恶性的、激素-敏感的前列腺癌形式。在另一个方面,本发明涉及用于诊断、检测、监测或预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌或向恶性的、激素-敏感的前列腺癌的进展的组合物,所述组合物包含PDE4D7表达产物或蛋白的核酸亲和配体和/或肽亲和配体。在本发明的一个优选实施方案中,所述组合物包含被修饰成起造影剂(acontrastagent)作用的核酸亲和配体或肽亲和配体。在本发明的另一个优选实施方案中,所述组合物包含对PDE4D7表达产物特异性的寡核苷酸集合、对PDE4D7表达产物特异性的探针、对PDE4D7表达产物或蛋白特异性的适体、对PDE4D7蛋白特异性的抗体和/或对PDE4D7蛋白特异性的抗体变体。在另一个方面,本发明涉及
PDE4D7作为标志物用于诊断、检测、监测或预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌或向恶性的、激素-敏感的前列腺癌的进展的应用。在另一个方面,本发明涉及用于检测、诊断、监测或预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌或向恶性的、激素-敏感的前列腺癌的进展的方法,所述方法至少包括下述步骤测定样品中PDE4D7的水平。在另一个方面,本发明涉及用于诊断、监测或预测恶性的、激素-敏感的前列腺癌或向恶性的、激素-敏感的前列腺癌的进展的方法,其中所述方法会辨别良性前列腺肿瘤和恶性的、激素-敏感的前列腺癌,所述方法包括下述步骤
(a)测定样品中PDE4D7的水平;
(b)测定样品中参照基因的表达水平;
(c)将测得的PDE4D7表达水平标准化成参照基因的表达水平;和
(d)对比标准化的表达水平和选择用于排除良性前列腺肿瘤的预定截止值,其中超过截止值的标准化的表达水平指示着恶性的、激素-敏感的前列腺癌,其中所述截止值是在约-2至+2之间,优选约0。在另一个方面,本发明涉及一种数据获取方法,其至少包括下述步骤
(a)测试个体中PDE4D7的表达;和
(b)将在步骤(a)中测定的表达与对照水平相对比。在本发明的另一个优选实施方案中,所述诊断、检测、监测、预测或数据获取是在从个体获得的样品上进行。在另一个方面,本发明涉及用于检测、诊断、监测或预测恶性的、激素
-敏感的前列腺癌或向恶性的、激素-敏感的前列腺癌的进展的免疫测定,其至少包括下述步骤
(a)测试从个体获得的样品中PDE4D7的表达,
(b)测试对照样品中PDE4D7的表达,
(c)测定步骤(a)和(b)中PDE4D7的表达的差异;和
(d)基于在步骤(c)中得到的结果,确定癌症的存在或阶段或癌症的进展,其中所述测试步骤是基于特异性地结合PDE4D7的抗体的应用。在另一个方面,本发明涉及用于辨别良性前列腺肿瘤和恶性的、激素-敏感的前列腺癌的免疫测定,所述免疫测定包括下述步骤
(a)测定样品中PDE4D7的水平;
(b)测定样品中参照基因的表达水平;
(c)将测得的PDE4D7表达水平标准化成参照基因的表达;和
(d)对比标准化的表达水平和选择用于排除良性前列腺肿瘤的预定截止值,其中超过截止值的标准化的表达水平指示着恶性的、激素-敏感的前列腺癌,其中所述截止值是在约-2至+2之间,优选约0。在另一个方面,本发明涉及鉴别个体对恶性的、激素-敏感的癌症疗法的适格(eligibility)的方法,所述方法包括
(a)测试从个体获得的样品中PDE4D7的表达;
(b)测试所述样品中参照基因的表达,和/或测试对照样品中PDE4D7的表达;
(c)相对于步骤(b)中对照样品中PDE4D7的水平,分类步骤(a)的表达水平;和
(d)在个体的样品被分类为具有增加的PDE4D7表达水平的情况下,将该个体鉴别为适合接受恶性的、激素-敏感的前列腺癌治疗。在另一个方面,本发明涉及用于分级一个或多个具有恶性的、激素-敏感的前列腺癌疾病的个体的免疫测定,其包括
(a)测试从个体获得的样品中PDE4D7的表达;
(b)测试所述样品中参照基因的表达,和/或测试对照样品中PDE4D7的表达;
(c)测定步骤(a)中PDE4D7的表达与步骤(b)中PDE4D7和/或参照基因的表达的差异;禾口
(d)在个体的样品具有增加的PDE4D7表达水平的情况下,基于在步骤(c)中得到的结果,将一个或多个个体分级为恶性的、激素-敏感的前列腺癌治疗。在本发明的另一个优选实施方案中,通过测量核酸或蛋白水平,或通过测定PDE4D7或参照基因的生物活性,完成所述表达的测试或测定,或另外完成。在本发明的另一个优选实施方案中,所述方法或免疫测定包括下述额外步骤将测得的核酸或蛋白水平或测得的生物活性与对照水平相对比。在本发明的另
一个优选实施方案中,所述参照基因是持家基因,特别优选GAPDH或PB⑶,或不同的磷酸二酯酶,特别优选PDE4D5。在本发明的一个优选实施方案中,通过测量核酸或蛋白水平,或通过测定PDE4D7的生物活性,完成测定步骤。在本发明的另一个优选实施方案中,所述方法包括下述额外步骤将测得的核酸或蛋白水平或测得的生物活性与对照水平相对比。在本发明的另一个优选实施方案中,所述方法或免疫测定包括下述额外步骤测定前列腺特异性的抗原(PSA)的水平。在本发明的另一个特别优选的实施方案中,-4ng/ml的PSA水平指示着恶性的、激素-敏感的前列腺癌。在本发明的另一个优选实施方案中,如上所述的样品是组织样品、尿样品、活组织检查样品、尿沉积物样品、血液样品、唾液样品、精液样品、包含循环肿瘤细胞的样品、或包含前列腺分泌的外核体的样品。在另一个方面,本发明涉及一种抑制性的药物组合物,其包含至少一种选自下述的组分
(a)直接地抑制PDE4D7活性的化合物,优选PDE4D7酶活性的拮抗剂;
(b)间接地抑制PDE4D7活性的化合物;
(c)PDE4D7蛋白的显性失活形式或其生物活性等效物;
(d)编码和表达PDE4D7的显性失活形式的核酸;
(e)对PDE4D7特异性的miRNA;
(f)PDE4D7反义分子;
(g)对PDE4D7特异性的siRNA;
(h)对PDE4D7表达产物或对PDE4D7蛋白特异性的适体;
(i)能够特异性地结合PDE4D7蛋白的小分子或肽拟似物;和
(j)对PDE4D7蛋白特异性的抗体和/或对PDE4D7蛋白特异性的抗体变体。在另一个方面,本发明涉及一种用于治疗或预防恶性的、激素-敏感的前列腺癌的抑制性的药物组合物,其包含至少一种选自下述的组分
(a)直接地抑制PDE4D7活性的化合物,优选PDE4D7酶活性的拮抗剂;
(b)间接地抑制PDE4D7活性的化合物;
(c)PDE4D7蛋白的显性失活形式或其生物活性等效物;
(d)编码和表达PDE4D7的显性失活形式的核酸;
(e)对PDE4D7特异性的miRNA;
(f)PDE4D7反义分子;
(g)对PDE4D7特异性的siRNA;
(h)对PDE4D7表达产物或对PDE4D7蛋白特异性的适体;
(i)能够特异性地结合PDE4D7蛋白的小分子或肽拟似物;和
(j)对PDE4D7蛋白特异性的抗体和/或对PDE4D7蛋白特异性的抗体变体。由于磷酸二酯酶4D7在恶性的、激素-敏感的前列腺癌的背景下被向上调节,PDE4D7抑制剂和调节(例如抑制
)PDE4D7、调节PDE4D7表达(例如抑制PDE4D7表达)或调节PDE4D7相互作用(例如抑制PDE4D7相互作用)的试剂,可以有利地用作药物。因而,通过抵消观察到的向上调节过程,PDE4D7抑制剂和/或调节剂可以用作药物,例如用作抵消与高PDE4D7表达或它的向上调节有关的所有或某些作用的药物。在另一个方面,本发明涉及一种刺激性的药物组合物,其包含至少一种选自下述的组分
(a)直接地刺激或调节PDE4D7活性的化合物,优选PDE4D7酶活性的变构激动剂;
(b)间接地刺激或调节PDE4D7活性的化合物;
(c)PDE4D7蛋白或其生物活性等效物;
(d)编码和表达PDE4D7的核酸;
(e)对PDE4D7miRNA特异性的miRNA抑制剂;
(f)脱***化剂;和(g)磷酸二酯酶置换因子。在本发明的一个优选实施方案中,所述抑制性的或所述刺激性的药物组合物被用于治疗前列腺癌,其依赖于PDE4D7的表达水平,其中根据下述步骤,测定和/或监测所述表达水平
(a)测定样品中PDE4D7的水平;
(b)测定样品中参照基因的表达水平;和
(c)将测得的PDE4D7表达水平标准化成参照基因的表达。在本发明的另一个特别优选的实施方案中,对于增加的和/或正在增加的PDE4D7水平,施用所述抑制性的药物组合物,对于降低的和
/或正在降低的PDE4D7水平,施用所述刺激性的药物组合物。在另一个方面,本发明涉及对PDE4D7蛋白特异性的抗体和/或对PDE4D7蛋白特异性的抗体变体的应用其用于检测、诊断、监测或预测癌症、或用于治疗癌症,优选前列腺癌,更优选恶性的、激素-敏感的前列腺癌。在本发明的另一个优选实施方案中,如上所述的癌症是前列腺癌。在本发明的另一个优选实施方案中,所述前列腺癌是恶性的、激素-敏感的前列腺癌。在本发明的一个特别优选的实施方案中,所述恶性的、激素-敏感的前列腺癌是激素-敏感的I-IV期前列腺癌、激素-敏感的复发的前列腺癌、或激素-敏感的转移的前列腺癌。从下面的详细描述,结合附图和实施例,会明白本发明的这些和其它特性、特征和目的,所述附图和实施例作为例证,证实了本发明的原理。描述仅仅为了举例而给出,不是限制本发明的范围。
图1在图IA和IB(图IA的延续)中给出了通过RT-PCR进行的人组织样品研究的概要,显示了PDE4D7相对于GAPDH的相对表达。指出了提供样品的患者的年龄和性别、组织类型、样品的外观、诊断、肿瘤等级(Gleason评分)、根据!“匪分期系统的时期(按照UICC的定义)、肿瘤的阶段和独立于标志物使用的对应的组织学验证。图2描述了正常的、良性的和恶性的前列腺组织样品中PDE4D7相对于GAPDH的相对表达水平的框图。在第1列中,显示了正常的/对照的组织样品中