血清γ-球蛋白的提纯.ppt

文档介绍：实验四血清γ-球蛋白的提纯
【实验目的】
、凝胶层析、透析法分离纯化蛋白质的基本原理及操作;
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实验原理
【实验原理】
(一)盐析法
定义:加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并
使从溶液中沉淀析出的现象。
原理: 破坏蛋白质两个稳定因素:水化膜和电荷层
中性盐:(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。
优点:蛋白质不变性,常用。
(二)透析法
定义:利用半透膜把大小分子分开的方法。
材料:特制的半透膜,截止分子量一般为一万。
临床应用:血液透析
(三)层析法
待分离物质随(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离物质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离蛋白组分在两相中反复分配,并以不同流速流经固定相实现分离。
凝胶层析法
沉降速度(v) 指在强大的离心力作用下,单位时间内物质颗粒沿半径方向运动的距离。 v=×10-4×D2(ρ-ρm)n2r/ηm
D —颗粒直径
ρ—颗粒的密度
ρm —介质的密度
ηm—介质粘度
r —旋转半径(物质质点所处位置与旋转中心的距离) N —转子转速
人血清中几种主要蛋白组分
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的%
清蛋白

69,000
57~72
α1-球蛋白

200,000
2~5
α2-球蛋白

300,000
4~9
β-球蛋白

90,000~150,000
~12
γ-球蛋白
~
156,000~950,000
12~20