文档介绍：江南大学
硕士学位论文
地衣芽孢杆菌普鲁兰酶编码基因的克隆与表达
姓名:张明焱
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:饶志明;沈微
20080801
摘要度的促进作用;而添加��、��和��对该酶无明显的激活或抑制作用;��.��.��且恢帜芄蛔ㄒ恍郧锌VЯ吹矸鄯种е械腝.��.糖菅键,从而剪下整个侧支,形成支链淀粉的解支酶。它在淀粉加工工业中有着非常重要的用途,可以大规模的提高淀粉的利用率和生产效率。普鲁兰酶可以单独使用,亦可以与其它酶配合使用,当前较成熟地应用于高葡糖浆,高麦芽糖浆和干啤酒生产中。普鲁普鲁兰酶基因,并被标注为��.多年来,地衣芽孢杆菌作为外源基因表达宿主被用于及其基因则国内外均未见实验研究报道。本论文以��椒ù拥匾卵挎吒司�旧�錎�中扩增出��基因蛋白编码的表达。在实验室发酵时,检测到的酶活大约为��该酶反应不需要金属离子的参与,但是很多离子如�十、��、��佳培养基:酵母膏�ィ�鞍纂�%,��以上结果表明,本研究构建的基因工程菌能够表达普鲁兰酶,实验室摇瓶发酵产的普兰酶为普鲁兰酶酶制剂的工业化生产及应用奠定了一定的基础。普鲁兰酶�兰酶的水解性质决定了它具有提高淀粉质原料利用率、降低粮耗的作用,因此它在淀粉加工工业中有着重要的用途和良好的市场前景。地衣芽孢杆菌的全基因组序列已在��年被公布,对基因组序列分析显示,其中有一段大小为��的片段可能编码包括普鲁兰酶在内的多种外源蛋白的表达,但有关地衣芽孢杆菌自身产生的普鲁兰酶区,插入大肠杆菌表达载体��启动子下游。经普鲁兰酶活性检测、��甈��及大肠基因组��腜�扩增分析表明,普鲁兰酶基因在��玫搅苏��痬�V刈楣こ叹��=�代后,经接种培养、诱导发酵及��从��ū砻骶哂辛己玫囊糯�榷ㄐ浴�重组菌所产的普鲁兰酶分子量约为��左右;重组酶的最适作用温度范围为�℃��℃,在��条件下,�℃��嬷�涿富钚员浠�淮螅蛔钍首饔胮�段��~��,在温度为�℃时,有较广泛的�稳定范围,�为��范围内,该酶都具有较高的活性;该酶具有很好的热稳定性,�℃保温��杂��サ牟杏嗝富睢��蚉��愿妹赣胁煌�潭鹊囊种谱饔茫惶砑覯��蚦�对酶活性有不同程��/�腟�使酶完全失活,这可能是由于该普鲁兰酶分子中缺乏二硫桥结构的缘故。对重组菌的发酵条件进行了初步优化,采取了单因素试验分别考察了不同的氮源、诱导时机、培养温度、初始�、装液量、接种量对产酶的影响。得到了产酶的最��%;产酶的最佳培养条件:培养�后诱导,培养温度为�℃,培养基的�值为��,装液量为��摇瓶加入培养基��,接种量�%。通过优化后酶活提高到��痬�笥摇�时,酶活约为��痬�黄浯置傅拿秆�灾实玫搅顺醪窖芯浚煌ü�苑⒔吞跫��杏�化,最佳发酵条件的普鲁兰酶产量平均可达到�.�縊.��痬�R虼耍�弥旯こ叹��关键词:普鲁兰酶,地衣芽孢杆菌,��秆�灾剩�⒔吞跫�呕��ィ琄��.��ィ琈��%,��:�
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名:敬圈越塑&。�鹤�魄蛆蕊关于论文使用授权的说明独创性声明本人声明所呈交的学位论文是拳人在导师指导��的研究工作及