文档介绍：河北农业大学
硕士学位论文
假蕈状芽孢杆菌34KD纤溶酶基因的克隆与表达
姓名:郭晓军
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:朱宝成
20080609
,通过连接构建了重组摘要本论文重点研究了假蕈状芽孢杆菌纤溶酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达,并做了一些枯草杆菌表达方面的研究。主要研究结果本实验室顾从土壤中分离筛选出具有纤溶酶活性的假蕈状芽孢杆菌,且对此菌株的纤溶酶蛋白进行分离纯化,得到单一活性组分,埃德曼降解法测得诵根据此十五个氨基酸在上进行比对,找到了十种ネ吹鞍仔蛄校根据相对应的编码序列的同源性设计了一对简并引物,并在朔直鸺尤肓薊和的酶切位点。以产纤溶酶的菌株假蕈状芽孢杆菌的基因组D0澹设计的引物进行竦昧艘桓鐾暾牧酵泛盖形坏愕南巳苊富駼质粒.,并对基因进行了测序。结果表明:此细菌纤溶酶基因全长,编码霭被帷S胂嗨菩宰罡叩男蛄衎比仅存在霭被岬牟钜欤兄行孕拷鹗舻鞍酌附峁褂颉源蟆@业鞍灼桨宸ê拖宋鞍装宸ň允婧嬗盏小时后的重组菌经超声波破壁后的胞内蛋白有但是大肠杆菌表达系统大部分为胞内表达,这样就为生产带来了很多的不便。而枯草芽孢杆菌由于其安全性和分泌胞外蛋白的特点,被认为是表达和分泌异源蛋白的理想受体。ü齈方法得到含基因的启动子、睦嗨转录终止信号的序列、核糖体结合位点及编码个氨基酸的信号序列,,。并将纤溶酶基因克隆到了载体上,待下一步进行枯草杆菌的分泌表达研究。本试验试图建立用基因工程的方法生产微生物纤溶酶的技术平台,以便进一步研究纤溶酶的功能、作用机理及在生命科学、医疗和保健等方面的应用潜力,为基因工程药物的开发奠定必要的理论和实践基础。关键词:假蕈状芽孢杆菌;纤溶酶;大肠杆菌;枯草杆菌;克隆;表达如下:歹猇。,经、低温诱导后,甈允景诤斜泶锾醮泶锊锏南喽苑肿恿看小为,比预计的分子量活性。
甌虎騦%..甌.,甀瑉℃.·℃/瑀:甤.,,.畃甋·.甋.
㈣遜胛淞觚痮,,;;.,.;;籩
导师繇韶舀学位论文作者签名:靠旦毛辜导师签名:司答签字日期:办矿年∥月橙学位论文作者签名:素洳苫年拢,日学位论文版权使用授权书独创性声明签字日期:邝阅阥月廴本学位论文作者完全了解逦壅些太堂有关保留、使用学位论文的规定,发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得通佰招┨没蚱渌逃沟难阅。本人授权逦佰招┨每梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄厥菘饨本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。签字日期:有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ学位论文作者毕业后去向:工作单位:邮编:通讯地址:电话:
把的纤溶酶主要是从丹参和蒲劐恐刑崛:Q笊锢丛吹南巳苊秆芯勘ǖ澜仙佟血栓性疾病及治疗方式纤溶酶的来源及国内外微生物产纤溶酶的研究现状随着人类生活水平的不断提高,血栓病已经成为严重危害人类健康的常见病、多发病,是死亡威胁最大的疾病之一,世界每年心血管病死亡人数约万。据卫生部统计,我国血栓栓塞性疾病发病人数已超过颍劳雎食ァ緇】。今后年,随着我国人口老龄化趋势的发展,心脑血管疾病将会越来越多的威胁我们的健康。目前对该症的治疗方法主要有三种:外科手术疗法【浚馐侨コKㄗ钛杆僦苯的方法,开始于世纪年代的法国,年代流行于美国。这种方法要求条件复杂,费用高,一般适用于管腔完全闭塞或狭窄程度超过%者,外科手术造成的死亡率在所有治疗手段中最高,手术取栓后往往引起血管狭窄且再发血管闭塞,并且需要配合溶栓药物使用。保守疗法【浚锤颊叱て诜美┱叛9芤┪锖拖∈脱R旱囊┪铩药物只能使血液粘稠度降低,血液容易通过,但破坏了血液成分的平衡,增大了心脏负担,血栓、动脉硬化依旧。溶栓疗法ü褂萌芩ḿ粒寡D橹械南宋鞍降解成可溶物质而使循环畅通,这是目前使用的主要方法,致死的危险性比保守疗法降低.%。可见,研制高效的溶栓药已成为临床的迫切要求。.巳苊傅睦丛“理想”的溶栓药应该具有下列特点:快速溶栓,对纤维蛋白特异,只作用于血栓而全身反应低,效力持久;出血危险性低;无全身性副反应,无抗原性,避免全身性纤溶、价廉等。近几年,寻找天然来源的纤溶酶也成了一个研究热点。在动物、植物、海洋生物、微生物中都发现了天然的溶栓物质。在动物来源的纤溶酶中,人们研究较多的是从蚯蚓【俊