文档介绍：聋岁厶栉素大学学位论文二聚化蜘蛛拖丝蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备夕方’���申请学位级别:授予学位单位:安铁洙教授��年��‘东北林业大学学科专业:发育生物学论文答辩日期:授予学位日期:答辩委员会主席:杨焕民教授论文评阅人:白秀娟教授孙中武教授学校代码:���学号:���指导教师姓名:论文提交日期:硕士东北林业大学�赹±��『�‘
�
,�����������������:�����:���������.���畓���.���������:�
●
摘要为了制备可用于蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,本研究利用研究室前期工作中获得的、根据核心序列设计的二聚化蜘蛛拖丝蛋白基因构建原核表达质粒�.�����,并且通过原核表达的方式得到大量重组蜘蛛拖丝蛋白�.���源酥刈榈鞍捉�蠬�标签特异性的亲和纯化,并以纯化后蛋白作为抗原,在佐剂的辅助下对新西兰大白兔进行多点皮下注射免疫。研究所得结果:���吮泶镌靥骞菇ǎ阂��甎�.��为模板扩增得到含有蜘蛛拖丝蛋白二聚体基因的���锲�危淮薖�片段与线性载体����.�嗔��玫街刈橹柿��.�����;利用引物引入酶切位点和����.�靥灞旧砻盖形坏愣灾刈橹柿V���端进行特异性酶切,后将酶切所得�片段与�����表达载体相连,最终得到可用于原核表达的重组质粒�.����¨。��刈榈鞍椎谋泶锖痛炕�航�刈橹柿��畃���.��;�氡泶镄透惺芴���.���校�秆〉玫奖泶镒纯鲎罴训木�辏憾源司�甑谋泶锾跫��忻�鳎�钪盏�到重组蛋白�.���吮泶锏淖罴袸��盏寂ǘ龋�露燃笆奔涮跫�6灾刈榈鞍捉����昵┨匾煨缘那缀痛炕��玫娇捎糜谥票付嗫寺】固宓拇炕�蟮鞍住���固逯票福捍炕�蟮��瓾�蛋白经��甈��笄薪河胱艏粱旌先榛��没�合物对四只健康新西兰大白兔进行多点皮下免疫,经过三次免疫后两只兔子的抗血清经���觳庑Ъ郾冉侠硐耄�渲校�罡咝Ъ畚�:�,���上述研究结果,为利用�.������重组质粒,采用原核表达的方式获得融合蛋白并纯化后用于抗体制备,最终将所得抗体用于蜘蛛拖丝蛋白的体外检测的方法奠定基础,还为加快建立在被毛中特异表达大量蜘蛛拖丝蛋白的新方法提供依据。关键词蜘蛛拖丝蛋白;原核表达;蛋白纯化:多克隆抗体制各
、析也��������甊�������—����—����������������·�����:��������������.���������������—���������������������.������畂���������甌�����.������.��—����.�������一���—��������簉��������琣������������������猻����������簆�����������狧�.��������,����.����籔����������;�������������●�����琣���.��籶��.,.�.
目录��.�笛槭约列畔ⅰ��������������������������������.�┲胪纤康鞍谆�蚨�厶迤�蔚幕竦谩��������������������摘要..........................................................................................................��呗郏���������������������������������������������������������������������������������������������������������蜘蛛丝简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯���.�┲胨康男灾省����������������������������璴��.�┲胨康姆肿庸钩伞�����������������������������.�┲胨康谋泶镅芯肯肿础���������������������������.�┲胨康挠τ谩�������������������������������原核表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯���.��吮泶镌靥濉�������������������������������.��吮泶锼拗骶�������������������������������.��吮泶锾跫�呕������������������������������蛋白纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯���.�缀痛炕����������������������������������.�榘彼岜昵�����多克隆抗体制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯