文档介绍：高效液相色谱及其在药物分析中的应用
摘要:高效液相色谱法的发展非常迅猛,许许多多的新方法不断涌现,它具有分离效率高,选择性好,分析速度快,操作自动化和应用范围广的特点。本文主要简单介绍高效液相色谱的知识及其在药物分析中的广泛应用,通过实例描述了高效液相色谱法的优点。
    高效液相色谱(HPLC)是结合经典液相色谱及气相色谱的分离原理。由于与气相色谱法相比,高效液相色谱法具有下列主要优点:①不受试样的挥发性和热稳定性的限制,应用范围广②可选用不同性质的各种溶剂作为流动相,而且流动相对分离的选择性有很大作用,因此分离选择性高;③一般在室温条件下进行分离,不需要高柱温。因而广泛应用于生物化学,生物医学,石油化工,合成化学,环境监测,食品卫生,以及商检,法检和质检等许多分析检验部门。高效液相色谱不仅仅是一种有力的分析工具,而且越益成为分离制备和纯化的手段。
  液相色谱在国内和国外已被广泛地应用于药物分析,尤其在我国,近十几年来HPLC方法越来越受到重视。中国药典1985年版才规定使用,该版只有8个品种规定使用HPLC方法检测,到了1995版达到113个品种,2000版药典的应用达到了282种,2005版仅药典一部的应用达到了479种,涉及518项;药典二部中采用高效液相色谱法的品种有848种,较2000年版增加了566次,其中复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。2010年药典则更多的用液相色谱法取代了某些药物含量测定的薄层法,并引入了各式各样的检测器。由此可见,我国高效液相色谱法在药物分析中的重要性。
1. 高效液相色谱仪的进展
    高效液相色谱(HPLC)是20世纪70年代迅速发展起来的一种分离分析技术,是目前各种色谱模式中应用最广的一个领域。据估计,世界上几百万种化合物中除20%宜用气相色谱(Gc)分离分析外,其余80%的化合物,包括大(高)分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC(正相HPLC、反相HPLC、离子交换色谱和离子色谱、体积排除色谱、亲合色谱等)进行分离分析。因此,自
80年代以来HPLC成为国际分析化学界发展最快的一个分支,无论是仪器的销售额,还是论文的发表数,均雄居同期所有分析仪器的首位,在很多学科领域内都得到了广泛的应用。
    HPLC仪器一般由输液系统、进样器(现有很多的都是自动进样系统)、色谱柱、检测器和计算机控制系统(工作站)组成(如图1),制备型仪器还配有馏份收集系统。其中,输液系统主要有高压输液泵,有的仪器还有在线脱气和梯度洗脱装置,如液相色谱仪安捷伦1200四元系统可以在使用不同溶剂的方法之间进行快速切换,可以使用二元、三元和四元梯度,还有岛津仪器自动进样,自动化仪器控制和数据处理。
检测器用于连续检测色谱柱流出的物质,进行定性定量分析。要求其灵敏度高、噪音小、基线稳定、响应值的线性范围宽等。常用的有紫外检测器,包括光
二极管阵列检测器,可快速提供检测物的紫外光谱,以帮助鉴别。蒸发光散射检测器适用于检测挥发性低于流动相的组分,主要用于检测糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、甘油三酯及甾体等,但是其灵敏度较低,此外,流动相必须是挥发性的,不能含有缓冲盐等。荧光检测器只适用于能产生荧光的物质,如生物***、维生素和甾体化合物等