细胞培养基本技术.ppt

文档介绍：细胞培养 池文杰
一、细胞培养的基本知识
(一)培养细胞的特性

贴附生长: 必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长:于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
2. 培养细胞的生长特点:

贴附并伸展,是多数体外培养细胞的基本生长特点。虽然血细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬浮状态中生长,但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长。

3. 细胞培养的生长过程
(1) 细胞系的生长过程(三个阶段):

取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养(1~4周)

细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种至两个或者更多的培养器皿中(数天到一周左右)

在此期间细胞开始时虽仍然存活,但生殖已经很缓慢并逐渐完全停止,进而细胞发生衰亡、死亡(传代30~50次以后)
(2) 每代细胞的生长过程
:包括游离期及潜伏期
游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮态,也称为悬浮期。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。10min~4h
潜伏期:此时细胞有生长活动,而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6~24h。
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又称对数期。此期间细胞增殖旺盛,成倍增长,活力最佳,最适合进行实验研究。细胞生长增殖状况可以依据细胞倍增情况(细胞群体倍增时间)及细胞分裂指数等来判断。(3~5天)
(平台期):
此期可供细胞生长的底物面积已被生长的细胞所占满,细胞虽尚有活力但已不再分裂增殖。此时细胞虽已停止生长,但仍存在代谢活动并可继续存活一定的时间。