文档介绍：在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100mL。
在10支装有5mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10mL。
轻摇试管,使液体充分混匀,置36±1℃培养箱中,培养24h。
观察每管是否产气,如不产气则报告为大肠菌群阴性;若有气体产生则为推测性试验阳性,需做进一步的证实试验。
5 证实试验
平板分离
自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃培养箱培养18~24h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。
复发酵试验
挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36±1℃培养箱中,培养24h。
凡乳糖发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,为大肠菌群阳性。记下证实实验的阳性管数,查最大可能数(MPN)检索表得出1000mL水样中总大肠菌群的MPN值。
总大肠菌群(MPN)检索表
二、大肠菌群膜法测定
1 定义
大肠菌群(coliform bacteria)为需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌,将带菌滤膜贴在含乳糖的选择性培养基上,经37℃培养24小时后,呈现深暗红色带金属光泽的菌落。
2 仪器
滤器
滤膜,。直径根据滤器规格,目前常用的有35mm和27mm两种。
抽滤设备
无齿镊子
其它仪器见《GB/T ××××-××公共场所茶具微生物检验方法,大肠菌群测定》中第3章。
3 培养基
品红亚硫酸钠培养基
成分:蛋白胨 10g
酵母浸膏 5g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
琼脂 10~20g
磷酸氢二钾
无水亚硫酸钠 5g
5%碱性品红乙醇溶液 20mL
蒸馏水 1000mL
储备培养基的制备
将磷酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白胨加到含有900mL蒸馏水的烧杯中,~,加入琼脂加热溶解,用蒸馏水补足至1000mL,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,115℃高压灭菌20min,置冷暗处备用。
平皿培养基的制备
将上述培养基加热融化,根据培养基的用量,碱性品红乙醇溶液与培养基按1∶50的比例,用灭菌吸管吸取一定量的碱性品红溶液置于灭菌空试管中。再按1∶200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,在沸水浴中煮沸灭菌10min。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基中,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基适量倾入灭菌的空平皿内,待其冷却凝固后置冰箱内备用。此培养基于冰箱中保存不宜超过两周,如培养基已由淡红色变成深红色,则