文档介绍：实验分组名单
地点:第三实验大楼306、303;时间:5月16日,周一,9:55分开始
实验步骤预先抄到实验报告纸上
姓名
组别
范佳艳
1
蒋萌
1
林玲
1
漏嘉斐
1
沈雨婷
2
陶莹
2
闻颖
2
张美娜
2
曹江涛
3
陈自翔
3
姜圣贤
3
李佳伟
3
张骁汉
4
郑祥一
4
周宁
4
朱俊瑾
4
包余婷
5
戴丹丹
5
楼韫璟
5
沈黎玥
5
吴思佳
6
徐吻吻
6
张莹
6
鉏浩悦
6
陈勇贞
7
戴宇浩
7
李耸
7
刘传扬
7
楼鑫锐
8
沈佳锋
8
王涛
8
吴彬彬
8
俞望舒
8
郑嘉敏
9
郑鑫默
9
朱晨栋
9
项晨涛
9
实验一 SOD的分离提取及活力测定
一、实验目的
掌握从大蒜中提取SOD的方法
掌握SOD的纯化方法
掌握改良邻苯三酚法测定SOD活性的方法
二、实验原理
邻苯三酚在碱性条件下会自动氧化,释放出O2-,同时自己转化生成有色物质,在3-4分钟内,这种吸光度的增加与时间成线性的规律。当有SOD存在的情况下,会将O2-处理掉,同时会抑制邻苯三酚的这种自氧化,使得吸光度的增加速度越来越慢。通过分析这种抑制程度就可以反映SOD的活性。
三、材料与设备
组织捣碎机或榨汁机、紫外分光光度计、石英比色皿1对、水浴锅、冰箱、小烧杯、玻璃棒、电子天平、滤纸、称量纸;新鲜大蒜、邻苯三酚(焦性没食子酸)、硫酸铵、5mM 、 -HCl、PH试纸(酸性碱性各2包);
(1)5mM、:甲液Na2HPO4 ,乙液KH2PO4 g/L,然后,+
(2)Tris-HCl的配法:用Tris-base配到所需的浓度,用HCl调到所需的PH值即可
四、实验内容
1、SOD粗酶液的制备
将新鲜的大蒜用蒸馏水洗净,滤纸吸干后称取约35g放入榨汁机内破碎匀浆(可以多个组并在一起打浆然后分发给各组,打浆时可加少许水),过滤或离心除去固体颗粒,取上清液,测定体积。将上清液置于60℃热处理20分钟,使杂蛋白变性,10000 rmp冷冻离心20min,取上清液测定体积。
2、SOD的纯化
按照粗提液的体积,查出0℃下达到一定饱和度所需硫酸铵的质量。将硫酸铵晶体研成白色粉末后,称取一定量的硫酸铵粉末缓慢加入SOD粗提液中,使之达到50%的饱和度,再放置于4℃冰箱2h。10000rpm、4℃离心20min,收集沉淀。将沉淀溶于最小量的5mM、。
3、SOD活性测定
试剂
体积(ml)
Tris-HCl( )
-Vs 注意看下文的说明
邻苯三酚(50 mmol/L)

SOD待测液
Vs
总体积

(注:分光光度计预先用Tris-HCl做对照调零)
在上表的反应体系中,先不加邻苯三酚,而是将邻苯三酚与其余成分分别提前25℃水浴预热5-10min,然后混合后,迅速摇匀,倒入1cm石英比色杯中,在320nm波长下每隔30s记录一次OD值,共测4min。计算每个时间段A值