文档介绍：目录实验一芦丁的提取精制与鉴定实验二精制芦丁的含量测定实验三发酵法生产丝氨酸实验四青霉素抑菌圈的观察时间安排: 星期一下午: 配置丝氨酸产生菌培养基及接种、金黄色葡萄球菌所需培养基及倒板星期二上午:青霉素涂布(如周一下午时间充裕可改到周一下午) 星期三上午:丝氨酸产生菌离心,兼做抑菌圈观察星期三下午:建立丝氨酸产生菌静息培养系统星期四整天:芦丁提取星期五上午:绘制芦丁标准曲线,及自己提取芦丁含量测定星期五下午:丝氨酸显色反应实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁( Rutin )亦称芸香苷( Rutinoside ),在植物界广泛存在,其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多,可作为提取芦丁的原料。槐花米系豆科植物 Sophora japonica 的未开放花蕾,具有调节毛细血管渗透性之作用,临床用作毛细血管止血药,如复方芦丁,也作为高血压的辅助治疗药物。除此之外,还可作为制药原料,用于制造槲皮素( Quercetin )、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、 6-而乙基氨基芦丁等。槐花米中芦丁的含量高达 12%~16%, 另含少量皂苷。芦丁水解后得到槲皮素, 皂苷水解后可得到白桦酯醇( Betulin )及槐花二醇( Sophoradiol )。芦丁为淡黄色细小针状结晶,含三个结晶水,熔点 177~178 ℃。;芦丁溶于热水( 1:200 ),难容于冷水( 1:8000 );溶于热甲醇( 1:7 ),冷甲醇( 1:100 );热乙醇( 1:30 ),冷乙醇( 1:300 ),难溶于乙酸乙酯、丙酮,不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色,酸化后又析出。其结构如下图: 一、实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水。溶解度:冷水 1:10000 ;热水 1:200 ;冷乙醇 1:650 ;热乙醇 1:60 ;冷吡啶 1:12 。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇,较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。三、实验器材研钵, 500mL 烧杯,广泛试纸,四层纱布,滤纸,漏斗, 10mL 试管,5m L 移液管,波棒,洗耳球,温控烘箱石灰乳,浓盐酸,镁粉,10% α-萘酚乙醇溶液,浓硫酸,乙醇,2% 二氯氧锆甲醇溶液, 2% 柠檬酸甲醇溶液四、实验流程槐米粗粉( 10g ) 置 250ml 烧杯中,加入一定饱和石灰水,加热,并维持 pH8 ~9 煮沸 20 分钟,趁热滤过滤液药渣用一定量饱和石灰水煮沸 10 分钟,维持 pH8 ~9 趁热滤过滤液药渣( ×) 合并在 60 ℃~ 70 ℃下用浓 HCl 调 pH 至4~5 静置,抽滤沉淀低温( 60 ℃)干燥,称重。按 1: 200 的比例加水, 加热使溶解,趁热滤过滤液静置,抽滤,减压干燥,计算收率芦丁精制品五、实验内容 1、芦丁的提取精制称取槐花米 10g ,置于干燥的研钵中用研钵挤压成粗粉。称取 -1g 的石灰粉。置于干净的小研钵中,加入 5mL 水后研成乳液备用。将槐花米粗粉置于 250mL 烧杯,加蒸馏水 100-150mL ,煮沸,在搅拌下加入石灰乳至 pH8-9 ,在此条件下微沸 20-30min ,过滤。在 60-70 ℃下,用浓盐酸调滤液至 pH4-5 ,搅匀,静置 1-2h ,过滤。沉淀用蒸馏水洗 2-3 次至中性,抽干, 60℃干燥得芦丁粗品。称定芦丁粗品重量,按 1:200 的比例悬浮与蒸馏水中,煮沸 10-15min ,趁热过滤,冷却滤液,充分静置结晶。抽滤, 60-70 ℃干燥得精制芦丁。称重,计算得率。 2、芦丁的鉴定取芦丁适量,加乙醇使溶解,分成三份供下述试验用: (1) 盐酸镁粉试验:取样品液适量,加2滴浓 HCl 、再酌加少许镁粉,即产生剧烈的反应,并逐渐出现红色至深红色。(2) 锆- 枸试验:取样品液适量,然后加 2% ZrOCl 2 的甲醇溶液,注意观察颜色变化,再加入 2%枸椽酸的甲醇溶液,并详细记录颜色变化。(3) α-萘酚- 浓硫酸反应:取样品液适量,加等体积的 l0%α-萘酚乙醇溶液, 摇匀,沿管壁缓加浓硫酸,注意观察两液界面的颜色。六、注意事项 pH ,既可以达到碱提取芦丁的目的,还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及 pH 值均不宜过高,否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀,同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。 HCl 调pH