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文档介绍：第八章印迹杂交技术
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第一节核酸分子杂交的基本原理
基本概念:
核酸分子杂交:
,可以形成异源双链核酸分子的过程。
杂交体:杂交形成异源双链核酸分子
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退火
核酸分子杂交
不同来源的核酸经变性和复性的过程,其中一些局部碱基互补片段在复性时形成杂化双链,此过程称分子杂交。
加热
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核酸分子杂交技术:
单链的核酸分子在合适的温度和离子
强度下,通过碱基互补形成双链杂交体的
一类技术。
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核酸杂交技术: 分子探针:带有某种标记物的分子 如核苷酸链片段
退火
加热
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核酸分子杂交的基本原理
DNA变性:
融解温度(Tm值):50%DNA变性的温度
DNA复性:
核酸杂交:
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DNA加热
50%DNA发生变性
此时的温度——融解温度
(Tm)
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DNA的变性与复性
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退火
核酸分子杂交
不同来源的核酸经变性和复性的过程,其中一些局部碱基互补片段在复性时形成杂化双链,此过程称分子杂交。
加热
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第二节探针与标记
一、探针的基本条件
①带有标记物,便于分析杂交体
②为单链核酸,双链核酸探针使用前需变性解链
③具有高度特异性,只与待测核酸杂交
④探针序列通常是基因编码序列,因为非编码序列特异性低
⑤探针标记灵敏度高而稳定,标记方法简便而安全
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