文档介绍：超氧化物歧化酶(SOD)的生产
第六组钱龙
SOD知识简介
超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。
按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种
SOD知识简介
SOD对氰化物和H2O2的敏感性
长时间用过氧化氢处理可使 CuZn-SOD
和 Fe-SOD失活,而Mn-SOD不受影响
SOD的吸收光谱特性
CuZn-SOD具有独特的紫外吸收光谱。由于色氨酸和酪氨酸的含量较低,它在280 nm处并没有最大吸收峰。
CuZn-SOD的可见光最大吸收波长都在680 nm左右, 这反映了酶分子中Cu2+的光学特性。
SOD知识简介
SOD稳定性及影响因素
PH、热、蛋白酶的影响:~,~pH11间能稳定存在。, CuZn-SOD中95%的Zn要脱落,,SOD的构象会发生不可逆的转变而使酶失活。
SOD对热的稳定性与溶液中离子强度有关。当离子强度很低时,即使加热到95℃, 其活性损失也很少其他因素:SOD活性受饮料的色泽、成分、酸碱度、乙醇含量等多种因素的影响,只有在无色、近中性、无乙醇饮料中SOD活性较稳定。另外还发现有机溶剂和Cl对SOD的活性具抑制作用
SOD的作用
e to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
它催化超氧阴离子转化为H2O2和O2的反应, 即催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应, 从而清除O2-·,2O2-·+2H+→H2O2+O2, 在生命体的自我保护系统中起着极为重要的作用, 在免疫系统中也有重要的功,因而它能防御氧毒性,增强机体抗辐射损伤能力,防衰老。
实训目的
(1)掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。
2)了解酶在提取过程中的两个参数:回收率、纯化倍数。
3)掌握离心机的使用。
实训原理
e to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
邻苯三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出 O2-,生成带色的中间产物,中间物的积累在滞留30~45s后,与时间成线性关系,一般线性时间维持在4min的范围内,中间物在420nm波长处有强烈光吸收。
当有SOD存在时,由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2,从而阻止了中间产物的积累,因此,通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
实训器材
e to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
大蒜,冷丙酮, 磷酸缓冲液(,)
氯仿-乙醇混合液
邻苯三酚
浓盐酸仪器:
天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、 50mL离心管( 8)、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶(8个)、玻璃棒(8根)、试剂瓶250mL(3个)、 500mL ( 3个)、250mL烧杯(16个)、试管带胶塞(80根)、移液管(5根)
SOD的生产
称取5克大蒜蒜瓣,加入石英砂研磨破碎细胞后,,()15ml,继续研磨20min,使SOD酶充分溶解到缓冲液中,然后6000r/min冰冻离心15min,放弃沉淀,取上清液。
——乙醇混合液搅拌15min,6000r/min离心15min,放弃沉淀,得到的上清液即是粗酶液