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优选第三章植物基因工程载体及其构建
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具备复制原点，在宿主细胞内能够自主复制；
具备合适的酶切位点，供外源片段插入；
含有供选择转化子的标记基因；
适当的拷贝数：较高的拷贝数，便于回收、制备；
载体的安全性：对受体细胞无毒害，不能随便转移；
载体大小：原则上要求载体越小越好；
如果需要外源基因的表达：启动子。
载体应具备的条件
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按来源分：
细菌质粒载体
病毒载体
噬菌体载体
转座子载体
Ti 质粒
Ri 质粒
人工染色体载体、线粒体载体、叶绿体载体等
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按功能分：
克隆载体：主要用来克隆和扩增DNA片段，能带动外源基因在宿主细胞中复制扩增。
表达载体：除具有克隆载体的基本元件外，还具有转录、翻译所必需的DNA元件，使外源基因在宿主细胞中有效表达。
整合载体：将目的基因插入到受体染色体中。
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目的基因克隆载体
中间载体
卸甲载体
转化载体
其功能是保存和克隆目的基因。与微生物基因工程相似，通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载体。
切除致瘤基因的Ti质粒或Ri质粒，是构建转化载体的受体质粒。
中间克隆载体
中间表达载体
大肠杆菌质粒插入T-DNA片段及目的基因、标记基因等。是构建中间表达载体的基础质粒。
含有植物特异启动子的中间载体。作为构建转化载体的质粒。
最后用于目的基因导入植物细胞的载体，工程载体。由中间表达载体和卸甲载体构建。
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第二节 质粒载体
质粒(plasmid)：存在于细菌或真菌染色体外的小型环状(线型质粒DNA分子——线虫、衣藻等)双链DNA分子(酵母的“杀伤质粒”是RNA)，可自身复制和表达。
不是寄主生长所必需的，但可以赋予寄主某些抵御外界环境因素不利影响的能力（带有抗性基因等）。
分子量在1-200 kb之间。
1、质粒（plasmid）概念
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质粒空间构型
超螺旋：共价闭合环状DNA
开环DNA：1条链上有一至数个缺口
线型DNA：
最快的是超螺旋，
其次是线性DNA，
最慢的是开环DNA。
2、质粒（plasmid）构象
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3、质粒的自主复制性
①严紧型质粒（stringent plasmid）
拷贝数少，只有1—3份拷贝。
② 松弛型质粒（relaxed plasmid）
拷贝数多，有几十—几百份拷贝。
质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制质粒。
DNA上的复制子结构决定了质粒与寄主的对应关系根据在每个细胞中的分子数（拷贝数）多寡，质粒可分为两大复制类型：
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