文档介绍：食品微生物实验技术讲义
(硕士研究生用)
食品科学与工程学院
微生物学实验技术的体系
具有独特性:需要独特的实验室装备和独立的训练
技术包括:显微镜术和制片染色技术、无菌操作技术、消毒灭菌技术、纯种分离培养技术、合成培养基技术、选择性和鉴别性培养基技术、深层液体培养技术、厌氧培养技术、菌种保藏、复壮技术、菌种选育技术等。
第一章微生物的纯培养和显微技术
计划学时:2
重点:微生物的分离和纯培养技术,常用的菌种保藏方法。细菌、放线菌、霉菌、酵母菌等的形态特征。
大多数动物植物的研究、利用都能以个体为单位进行,而微生物由于个体微小,在绝大多数情况下都是利用群体来研究其属性,微生物的物种(菌株)一般也是以群体的形式进行繁衍、保存。在微生物学中,在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture),而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果,因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。相应的,微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术,因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。显微技术包括显微标本的制作、观察、测定、分析及记录等方面的内容。实际上,正是由于显微技术及微生物纯培养技术的建立才使我们得以认识丰富多彩的微生物世界,并真正使对微生物的研究发展成为一门科学。
第一节微生物的分离和纯培养
一、无菌技术
微生物通常是肉眼看不到的微小生物,而且无处不在。因此,在微生物的研究及应用中,不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物,而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”,防止其他微生物的混入。在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique),它是保证微生物学研究正常进行的关键。
1. 微生物培养的常用器具及其灭菌
试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish,Petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具,在使用前必须先行灭菌,使容器中不含任何生物。培养微生物的营养物质(称为培养基(culture medium))可以加到器皿中后一起灭菌,也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成,这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。
2. 接种操作
用接种环或接种针分离微生物,或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养,是微生物学研究中最常用的基本操作。由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染,因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行,其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作,或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。操作箱或操作室内的空气可在使用前一段时间内用紫外灯或化学药剂灭菌。有的无菌室通无菌空气维持无菌状态。
用以挑取和转接微生物材料的接种环及接种针,一般采用易于迅速加热和冷却的镍铬合金等金属制备,使用时用火焰灼烧灭菌。而移植液体培养物可采用无菌吸管或移液枪。
接种①
    用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管,管口并齐,并使斜面向上成水平状态。右手拧松棉塞,但不要取下。
接种②
    右手拿接种环(如握钢笔),在火焰上烧灼灭菌。注意:有可能伸入试管内的接种环其余部分也要烧灼,特别是箍处。
接种③
在火焰边用右手无名指和小指夹住两个棉塞,将它们取下(不能放下)。同时左腕转动,烧灼管口一周,勿烧得过烫。注意:不要将酒精灯碰翻,以免烧伤。
接种④
    将接种环伸入试管内,让环先接触培养基上未长菌的部位,使环冷却。然后,轻轻挑取少量菌体,立即将接种环抽出。
接种⑤
    在火焰旁迅速将沾有菌体的接种环伸到斜面培养基的底部,由里向外轻轻划蛇形细线,线要划密一些。注意不要将培养基划破,也不要使接种环接触到管壁或管口
接种⑥
    抽出接种环,再用火焰烧灼管口,并在火焰上方将棉塞塞上。将接种环在火焰上烧红灭菌,接种致病菌时更要注意这点。将棉塞旋紧。注意:棉塞与火焰的距离要适当,以免棉塞燃烧。
二、用固体培养基分离纯培养
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生