荧光定量PCR技术讲座20110904.ppt

文档介绍：北京康为世纪生物科技有限公司
实时荧光定量PCR
Real Time Quantitative PCR
内容
miRNA的特点及检测
荧光定量PCR检测
microRNA
长度20∼24nt 单链小分子RNA
与目标基因3’端非编码区的识别位点相结合
导致目标基因mRNA分子稳定性下降,半衰期变短,或mRNA分子结构变化(5‘脱帽),从而表达水平下降。
3’
AAAAAAAA
5’cap
miRNA作用靶点
编码区
mRNA
microRNA分子功能
microRNA 的来源
miRNA前体与成熟体
靶点识别–不严格互补配对
一个miRNA可调节多个基因
一个基因可受多个miRNA调控
60%人类蛋白基因受miRNA调控
miRNA 与 siRNA的异同
分子形式无区别,都是由Dicer产生的~22nt小分子
分子功能近似,都导致目标基因表达水平下降,但通常siRNA效果更剧烈
产生来源不同
miRNA有其基因,内源性表达
siRNA多数情况下为人工外源导入
miRNA siRNA
miRNA 与 siRNA的异同
miRNA 检测与定量
经典方法:
放射标记
Northern杂交