文档介绍：食品中蔗糖的测定方法酶-比色法
食品中蔗糖的测定方法,一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中,还有其他
糖类被水解为还原糖,导致测定结果偏高。本标准采用的酶-比色法是在检索了近20年148
篇国外文献的基础上,经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(β-果
糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖),灵敏度高,操作简便,因此测定结果准确。
蔗糖酶解后的产物-葡萄糖的测定方法,与 GB/T 16285-96保持一致。
食品中蔗糖的测定方法 GB/T 16286-96
酶-比色法
1 范围
本标准规定了用酶-比色法测定食品中蔗糖的方法,适用于各类食品中蔗糖的测定。
(蔗糖)/mL(试液)。
2 原理
在β-果糖苷酶(β-FS)催化下,蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD)
在有氧条件下,催化β-D-葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化,生成D -葡萄糖酸-δ-
内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化,过氧化氢与4 -氨基安替比林和苯酚生成红
色醌亚***。在波长505nm处测定醌亚***的吸光度,计算食品中蔗糖的含量。
β-FS
C12H22O11 + H2O ────> C6H12O6(G) + C6H12O6(F)
GOD
C6H12O6(G) + O2 ────> C6H10O6 + H2O2
POD
H2O2 + C6H5OH + C11H13N3O ────> C6H5NO + H2O
3 试剂
组合试剂盒
1号瓶:内含β-果糖苷酶(fructosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠;
2号瓶:内含 磷酸盐缓冲液(pH=) 200mL,其中含 4 -氨基安替比
林0. 00154mol/L;
3号瓶:内含 ;
4号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)800U(活力单位)、过氧化物酶(辣根,
peroxidase)2000U(活力单位)。
1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。
酶试剂溶液
将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解,使其体积为66mL,轻轻摇动(勿剧烈摇动),使
酶完全溶解。此溶液即为β-果糖苷酶试剂,其中柠檬酸(缓冲溶液),
pH=。在4 ℃左右保存,有效期一个月。
将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。
,轻轻摇动(勿剧烈摇动),使酶完全溶解,
即为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存,有效期一个月。
***化钾溶液
***化钾[)6·3H2O,GB1273,分析纯],溶于100mL 重蒸馏水中,
摇匀。
(ZnSO4·7H2O,GB666,分析纯),溶于100mL重蒸馏水中,摇匀。
(GB629,分析纯),溶于100mL重蒸馏水中,摇匀。
蔗糖标准溶液
称取经100±2℃烘烤2h的蔗糖(HG3-1001,分析纯)