文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
骨保护素蛋白对骨质疏松及血管钙化作用机制的研究
姓名:孙静
申请学位级别:硕士
专业:老年医学
指导教师:庞小芬
20090501
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缩略词
OPG osteoprotegerin
RANKL ligand of receptor activator of NF-κB
BMD bone mineral density
IMT inteima-media thickness
NTX N-telopeptide of typeⅠcollagen
TES Testosterone
E2 Estradiol
SHBG sex hormone-binding protein
AKP alkaline phosphatase
CYP1A1 Cytochrome P450, subfamily I, polypeptide 1
BSA bovin serum albumin
OPG-/- opg knock out
OPG+/+ wild type
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日期: 年月日
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日期: 年月日日期: 年月日
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骨保护素蛋白对骨质疏松及血管钙化作用机制的研究
摘要
目的: (OPG)对骨质疏松及血管钙化的作用机
制,从基础和临床角度证实骨保护素蛋白在这两种疾病发病中的作用以
及相互关系;2. 探讨 CYP1A1 基因第 7 外显子中多态性位点与老年男性
骨密度的关系。
方法:1.(1)收集来自 2006 年 1 月至 2007 年 9 月上海瑞金医院老年
科门诊和住院患者;(2)提取外周血基因组 DNA 用于进行基因型检测;(3)
同时测量入选者的骨密度(腰椎 2~4 前后位、髋关节、股骨颈、Ward's
三角、髋部整体)、颈动脉 IMT 值、各项生化指标。2.(1)由上海南方模式
生物研究中心提供 OPG 基因剔除小鼠;(2)分离小鼠主动脉血管平滑肌细
胞并进行原代培养,待大部分组织块长出细胞晕相接触时传代,实验用第
3-8 代细胞;(3)利用形态学及免疫荧光方法鉴定主动脉血管平滑肌细胞;
(4)分组诱导血管平滑肌细胞钙化,并测定细胞钙沉积量及细胞碱性磷酸
酶(AKP)活性。
结果:1.(1)上海地区男性OPG基因启动子区存在950T-C单核苷酸突
变位点,按基因型分为三组(TT 型、型)。各组患者的一般
情况以及临床相关指标无统计学差异,具有可比性; (2)950T-C位点基
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因分布频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律;(3)腰椎TT基因型组与TC
及CC基因型组比较骨密度显著下降,但三组间颈动脉IMT无显著性统计
学差异;2.(1)野生型小鼠与OPG基因敲除小鼠主动脉切片比较显示
OPG-/-小鼠主动脉血管壁平滑肌层出现钙化斑块;(2)
的培养基培养OPG+/+细胞钙沉积很少;OPG-/-细胞钙沉积即出现明显增
加;当磷浓度>,细胞钙沉积随着培养时间的延长显著增加;
(3),OPG+/+细胞ALP活性随时间变化很
小,OPG-/-细胞ALP活