文档介绍：上海交通大学
博士学位论文
多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送系统的研究
姓名:宋姝贤
申请学位级别:博士
专业:生物医学工程
指导教师:徐宇虹
20080901
多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送系统的研究摘要症死亡的人数呈逐年增长趋势。多年来,肿瘤治疗一直是生命科学研究领域中关注的焦点,除外科手术、放射治疗之外;药物治疗是主要的治分子抑制剂、基因药物等,虽然是针对肿瘤相关的特异性分子、基因发挥作用,有一定的靶向意义,但是进入体内后也分布于全身,只有少量由此可见,肿瘤药物治疗效果的限制,很大程度上在于药物缺乏分布特含有聚乙二醇闹侍澹梢蕴颖芡茨谄は低车牟痘翊佣动靶向作用;针对肿瘤相关受体,将其特异性配体连接在脂质体表面,利物,起到主动靶向作用。将这两方面的靶向特征相结合的长循环配体脂恶性肿瘤,又称癌症,是一类严重危害人类生命的疾病,全球因癌疗手段之一。很多具有显著细胞毒作用化学类药物、放射性药物被开发,由于缺乏特异性;随着血液循环分布到全身后不仅作用于肿瘤细胞的也作用于正常细胞,会引起很大的毒副作用;而日益发展起来的抗体、小药物能达到治疗部位发挥作用,同时可能导致正常组织器官的功能异常。异性。为了解决这一瓶颈问题,达到高效低毒的疗效,靶向药物输送成为提高疗效的一个重要途径。脂质体作为药物载体广泛应用于肿瘤药物输送中,采用不同种类膜材制备的脂质体有不同的药动学性质,具有不同的药物释放特点。膜材长脂质体在血液中的循环时间,透过肿瘤血管向肿瘤部位浓集,起到被用配体和受体特异性识别机制引导脂质体向靶部位选择性聚集并释放药博士学位论文;
表达受体被作为靶标,通过细胞表面受体特异性识别相应配体的机制,尽管能特异性结合受体或受体表达细胞,但却不一定能有效地用于构建鉴于此,本课题中将小分子多肽用来修饰长循环脂质体,并通过体内外实验考察该脂质体对特定受体表达细胞或肿瘤组织的靶向性,一方多肽导向脂质体靶向肿瘤输送系统。另一方面,可以优化和建立研究靶向脂质体输送系统靶向性的体内外模型,提供一个有效的多肽配体筛选聘髁诵灾饰榷ǖ某ぱ酚ü庵侍澹耘涮宀迦敕ńū砥ど脂质体系统。根据激光共聚焦显微镜观察侍逵敫弑泶顴细胞慕岷嫌ü猓髡⒂呕飧鲋侍逑低车闹票阜椒ḿ捌溆细胞共孵育发生结合的条件,初步建立了配体脂质体特异结合受体的细胞模型。在我们的前期工作中,已经通过噬菌体展示技术、亲疏水性分质体,需要高特异性的配体和稳定的脂质体系统,以大大增强肿瘤药物的靶向性。为了构建高效的靶向药物输送系统,将肿瘤相关的特异性表达或高将配体连接的药物载体导向肿瘤组织。在受体介导的靶向系统中,作为“弹头呐涮澹タ怪猓嚯男奘沃侍宓纫┪镌靥宓枷蛑琢鱿喙特异性受体释药,具有广阔的前景。针对特异性受体筛选相应的多肽配体,可以采用噬菌体库展示、序列比对等方法,但是筛选到的一些多肽靶向输送系统。面,得到能高特异性靶向受体细胞或肿瘤组织的多肽配体,建立高效的平台。本论文的主要内容及结果总结如下:因子受体的天然配体奘沃侍骞菇艘桓鑫榷ǖ呐涮多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送系统的研究
析、序列/结构比对分析、计算机虚拟设计,针对大多数肿瘤细胞高表达奘蔚呐涮逯侍遄魑Q粜圆握眨谰菟⒌呐涮逯侍逵胂赴胞的多肽、A烁钢赂钊氲乜疾煺饬礁龆嚯呐涮錎奘蔚挠ü庵侍寤蛟匾┲侍遄魑Q芯慷韵螅箍A艘幌盗械ü庵体与不同细胞的结合荧光,并以游离蚨嚯木赫岷螲细胞考察多肽脂质体的结合特异性。结果表明,与对照脂质体相比,多肽脂质体除了与赴⑸苛业姆翘匾煨越岷希肫渌泶顴南赴飨阅芫赫岷舷赴砻媸芴澹鸲杂Χ嚯闹侍逵结合的特异性。采用流式细胞技术测定一定数量的细胞样本上特异结合的脂质体荧光强度,进行更准确的量化分析统计。结果表明,以非靶向脂质体为对照,或奘蔚闹侍逶贖或赴咸异性结合并内吞引起细胞荧光强度增大。此外,用、阿霉素脂质体,对照非靶向脂质体阿霉素和游离阿霉素,用壬验来考察这两个配体所构建的脂质体阿霉素靶向高表达细胞的细胞毒性作用。,对于蚐两种细胞,或奘蔚闹的受体和受体初步筛选出一些有潜力的候选多肽配体。以结合的方法,从中进一步选出能够介导脂质体显著结合高表达细捌涞枷虻脂质体系统是否能够高特异性靶向高表达的肿瘤细胞,着重将、体外实验。通过激光共聚焦显微镜技术,观察多肽、均发生特异性结合,而且能促进细胞内吞作用。在竞争实验中,蛋白多肽或赴岷霞跞酰芴宓目杀ズ托猿浞炙得髁烁弥侍逵胂赴芴葱奘卧博士学位论文
细胞毒性。同时,闠检测结果还表明,当多肽或蛋白浓度在痬艿枷蛑侍逄匾煨越岷舷赴⒋俳谕蹋銮吭匾┲非靶向肽、游离荧光物质、非靶向荧光脂质体的比较,探讨了多肽、向性。荧光修饰的多肽、较短时间内在肿瘤部位有聚集,但很快清除。修饰的脂质体注入裸鼠以看出,从注射后∈笨J迹谥琢霾课挥杏ü庵侍宓