文档介绍：玫瑰花环试验是体外检测人和动物细胞免疫功能的一种方法。E—玫瑰花环试验是T淋巴细胞计数的一种重要方法。由于人和动物的T淋巴细胞表面有红细胞受体,因此红细胞可以粘附到T淋巴细胞的周围而形成玫瑰花样的细胞团。在红细胞中,以绵羊红细胞最为常用。B淋巴细胞则没有红细胞受体,所以不能形成E—玫瑰花环,以资鉴别
实验目的
练****取外周血
熟悉淋巴细胞和外周血单个核细胞(PBMC)的分离方法
学****E花环试验的操作方法
观察显微镜下E花环的形态
实验原理
本实验采用的是密度梯度离心法。该方法是根据各类血细胞比重的差异(外周血中各种细胞的密度不同,,,±),利用比重介于某两类细胞之间的细胞分离液对血液离心,使一定比重的血细胞依相应的密度梯度分布于不同的独立带,从而达到分离的目的。
实验原理
人 T淋巴细胞表面的CD2分子即绵羊红细胞受体(ER),在一定的实验条件下,可与绵羊红细胞(SRBC)结合,形成玫瑰花结,称为E玫瑰花环试验(erythrocyte-roseette formation test)。
应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。
实验原理
E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。
实验原理
T细胞
SRBC
E受体(CD2)
SRBC受体
E玫瑰花环实验→判断细胞免疫功能
T
B
T
T淋巴细胞玫瑰花结电镜照片
T淋巴细胞玫瑰
花结示意图
实验步骤
,再加2ml的Hangs液稀释(动作要快);
,将抗凝血全部沿管壁缓慢加入,注意保持两种液体界面清晰(动作缓慢),以2000rpm 离心20分钟,离心后分为4层。
(灰白层)至一刻度离心管内。
,1000rpm离心10分钟,弃上清,沉淀主要为淋巴细胞。
稀释的血液
分离液
离心
稀释的血液
分离液
稀释的血浆
单个核细胞
分层液
粒细胞、红细胞
实验步骤
5,,加入等量1%RBC悬液,1000rpm离心5min,取出.
6,用手指轻弹试管来轻悬沉淀(不能吹打),取一滴滴加在载玻片上,显微观察。