文档介绍：cDNA第一链合成试剂盒说明书
产品组成
cDNA第一链合成试剂盒
Cat. No.
25次制备
7306025
100次制备
7306100
5×gDNA Buffer
RNase-Free ddH2O
5×RT Buffer
RT Enzyme Mix
RT Primer Mix
60 μl
ml
110 μl
60 μl
110 μl
220 μl
ml×2
420 μl
220 μl
420 μl
产品储存与有效期
-20℃保存有效期为壹年。
技术支持
杭州新景生物试剂开发有限公司研发部:e-mail: technical@, 电话:400-0099-857。
产品介绍
本试剂盒是一种高效、快速并可以去除基因组DNA污染的反转录系统,操作步骤简单,可在半小时内完成cDNA第一链的合成,非常适合荧光定量PCR及普通RT-PCR实验。本试剂盒含有高效去除基因组DNA的gDNase;通过42℃,3 min即可去除gDNA,有效避免了总RNA中基因组DNA的干扰。本试剂盒所含的高效反转录酶RT Enzyme,42℃,15 min即可完成cDNA第一链的合成。本试剂盒还具有与RNA模板高亲合性的特点,能通读GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。
用户需自备的试剂与物品
水浴锅或普通PCR仪
冰浴
RNase-free的PCR管
移液器及RNase-free吸头
一次性手套及防护用品和纸巾
台式小量离心机()
注意事项:
以下操作步骤请在冰浴上进行,以避免RNA降解。
对于二级结构非常复杂的RNA模板,推荐将模板RNA在65℃孵育5分钟后迅速转移到冰浴中,再进行cDNA的合成。
RT Primer Mix中含有Oligo-dT和随机引物,如果用户需要单独使用Oligo-dT或者基因特异性引物,请按Oligo-dT Primer 50 pmol/20 μl;或者反向基因特异性引物5 pmol/20 μl的比例加入引物,并将加入引物的体积用RNase-Free ddH2O调整为4μl后替换RT Primer Mix。
操作步骤:
以下操作步骤适用于模板量为50 ng-2 μg的总RNA,如果总RNA量大于2 μg,请按比例扩大反应体系。
1. 将模板RNA在冰上解冻;5×gDNA Buffer、RNase-Free ddH2O、5×RT Buffer、Primer Mix、在室温(15-25℃)解冻,解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体。
2. 按照表1的基因组DNA的去除体系配制混合液,彻底混匀。简短离心,并置于42℃,孵育3 min。然后置于冰上放置。
* RNA的完整性对逆转录非常重要,若RNA模板被降解,将导致cDNA产物减少,或者不能扩增长片段的基因。
表1 gDNA去除反应体系
5×gDNA Buffer
2 μl