文档介绍：上海交通大学
博士学位论文
在实验性神经再生中GIT1作用的初步研究
姓名:王懿
申请学位级别:博士
专业:外科学(神经外科学)
指导教师:沈建康
20080501
在实验性神经再生中作用的初步研究要摘细胞模型,研究在神经细胞的凋亡和神经突触再生过程中的可能的中枢神经的修复和再生一直是困扰医学界的世界难题。各种神经系统的疾病都是由于神经细胞数量和功能的损害所导致,因而研究中枢神经的修复和再生需要从两方面着手。一方面要研究如何保护神经细胞延缓凋亡的发生和促进神经细胞的存活;另一方面要研究如何促进神经细胞的功能结构一神经突触的再生延长以及与靶组织建立联系,恢复正常的功能。近年来,在研究中枢神经再生方面,已经取得了长足的进步,发现中枢神经系统的再生在适当的条件下是可能。很多的特异性的因子和蛋白质被发现与中枢神经系统的再生相关,并在细胞内庞大复杂的信号传导网络中参与调控的中枢神经细胞的凋亡,存活和突触再生。荊蛋白偶联受体激酶作用蛋白,含有复杂的复合区域结构。目前的研究发现鞍自诘骺叵赴羌埽赴硕そ煌ㄖ杏兄要的作用,也发现了斡肷窬赴婊詈蜕窬淮ピ偕墓獭N们用和赴褪由窬鹕四P头直鹱魑L逋夂突钐宓纳窬作用和机制,为进一步研究中枢神经系统的修复再生提供基础。
实验一在体外神经细胞凋亡中的作用方法:只盏糔细胞成为具有神经细胞特性的细胞,转染的方式在细胞内导入基因和表达。无血清培养诱导细胞凋亡,观察在细胞凋亡中的作用。肈椒诱导的凋亡中,凋亡发生率明显低于其他组。贕泶锏腘第一部分在体外神经细胞中作用的初步研究目的:研究在体外神经细胞中凋亡中的作用和可能的作用机制。用神经细胞标记物∟。结果:甆细胞经过诱导可以分化为泶镅粜缘具有神经细胞特性的细胞。瓽缺泶锏腘赴谖扪G胞发生凋亡的过程中,蚉的活性明显高于其他组。结论:,提示可能参与神经细胞凋亡和存活的过程,延缓了神经细胞凋亡的发生。瓽赡芡ü调蚉的途径参与神经细胞的凋亡和存活的过程。
实验二在体外—神经细胞凋亡和轴突生长中的作用目的:研究在—神经细胞凋亡和轴突再生中的作用。方法:盏糞猄赴晌>哂猩窬赴匦缘南赴⒂神经细胞标记物鉴定分化的结果。孟俨《咀H镜姆式在—细胞内导入基因和表达。用盏糞猄赴亡,检测不同组别的—细胞凋亡过程中的活性,—神经细胞轴突长度的变化,观察在神经轴突生长中的作用。结果:甋神经细胞在分化诱导后可以表达泶颎腟猄赴赟诱导的凋亡过程中的活性明显低于其他组。泶颎腟细胞的轴突长度明显高于其他组。结论:甋细胞可以作为研究神经细胞的细胞模型。瓽在赴幸材苎踊合赴牡蛲觯映ご婊睿乙彩峭ü钪降低作用的。瓽梢源俳鳶猄赴嵬坏纳ぃ其作用的途径还不清楚,可能也是通过途径作用的。
方法:ü⑻宥ㄏ蚣际跸蚰阅谏锨鹱⑸溆ü馑孛改嫘斜昙鞘神经。显微手术进行视神经的夹闭损伤,采用不同的夹闭时间,即秒,像检测。比较不同夹闭时间的视神经的成像,选择合适的夹闭时间。导增强绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体,取视网膜检测视网膜神经节细模拟视神经的损伤。ü俨《驹靥遄5荚谑油ど窬谙赴媳泶第二部分在活体视神经损伤模型中作用的初步研究实验一腺病毒载体表达的裸鼠视神经损伤模型的建立目的:建立研究体内中枢神经再生有效可靠的视神经损伤的模型。种雍分钟。眼球后视神经起始段注射荧光素,并进行体内发光成视网膜层荧光素酶的抗体染色。ü⑻宥ㄏ蚣际跸蚰阅谏锨鹱⑸渥胞的增强绿色荧光蛋白表达,比较两侧视网膜上被增强绿色荧光标记的视网膜神经节细胞的数量。结果:煌募斜帐奔秒,种樱分钟鹕说氖由窬都没有荧光素的成像。煌斜帐奔秒,种樱分钟鹕视神经后的视网膜上都没有荧光素酶的表达。ú嗍油ど窬谙赴标记的增强绿色荧光蛋白的细胞数没有明显的差异。结论:由窬斜账鹕胱阋允故由窬峤嫦蛟怂椭卸希增强绿色荧光蛋白方法,可以用来作为视网膜神经节细胞的标记,观察视网膜神经节细胞的数量变化,以及在视网膜神经节细胞上用腺病毒载体表达治疗基因。
目的:研究在视神经损伤的裸鼠中对于视网膜神经节细胞的或,并通过眼球内注射昙鞘油ど窬谙赴鄄焓油ど法建立裸鼠视神经损伤模型,用昙鞘由窬宋鄄焓由窬鹕实验二在裸鼠视神经损伤模型中作用的初步研究凋亡和视神经纤维再生延长的影响作用。方法:寐闶笞魑J由窬鹕说哪P停昧⑻宥ㄏ虻姆椒ㄔ谏锨内注射入或的腺病毒载体,在视网膜神经节细胞中表达经节细胞在视神经受损后出现的凋亡过程中的作用。猛姆后第,旌螅由窬宋词油ど窬谙赴闹嵬坏长度,研究在视神经纤维再生延长过程中的作用。结果:泶颎氖油ど窬谙赴谑由窬鹕撕齑婊数为/,飨愿哂诿挥斜泶颎腅榈拇婊钍.,有显著性差异。泶颎氖油ど窬谙赴轴突生长在第,烀飨愿哂贓椋⑶矣邢灾圆升。结论:在视神经损