文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
整合素α<,V>β<,3>与柯萨奇B组病毒感染以及柯萨奇B组病毒
诱导凋亡的研究
姓名:吴琛耘
申请学位级别:硕士
专业:医学微生物学
指导教师:刘晶星
20040401
肟氯鍮组病毒感染以及柯萨奇椴《居盏嫉蛲龅难芯整合素中文摘要且览敌汀NA酥な悼氯鍮组病毒感染后是否会诱导细胞凋亡以及细了研究整合素贑感染细胞过程中的作用,,艮单克隆抗体以及含有蛄械暮铣啥嚯姆獗誋赴砻娴南嘤ξ坏悖再用一感染细胞,培养螅ü韵赴”淝榭龅墓鄄旆⑾郑/.和/的獗蘸螅直鹩ズサ南赴”浔灰种啤R此我们认为,腥鞠赴墓讨校纤仳螧遣《靖腥竞腿肭值闹匾J合素珺氩《镜慕岷侠昧薘序列,但可能还存在其他途径。的形态学改变。已知肠道病毒诱导的细胞凋亡存在两种类型:览敌秃胞凋亡的类型,我们将一感染细胞,通过观察感染后、、南赴翁约敖鲜龈魇倍蔚南赴呀夂蠼衱分析。我们发现,细胞在感染后形态正常,感染后耙院蟾魇倍尉硐出明显的形态学变化,同时感染后细胞各时段的一条强的特异性条带。我们的试验表明,腥竞罂捎盏枷赴⑸整合素是‘类重要的细胞表面受体,也是许多病毒感染宿主细胞的受体。为痬的抗体封闭后,分别有%和%的细胞病变被抑制;用体,但可能不是唯一的受体,尚存在其它有助于病毒入侵细胞的机制;,凋亡的细胞表现出特有在处均出现览敌缘蛲觯襝一谋泶镆T缬谙赴翁谋浠关键词:纤豏凋亡
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整合素S肟氯鍮组病毒感染的关系第一部分是一类震要懿缨腿表嚣受俸,主要余霉绥照与绒飚羚基屡之麓酶稳互修复、骨骼的再吸收等等“K怯蒩和礁鲅堑ノ灰苑枪布奂噱庑纬傻巽二聚侮,总毕衲摇焖G骥噱ǚ肿恿糠主呶—霾.,⒖珉⒁个短的胞内区霭被组成,到目前为止,融发现种ノ葶曩颉焖G嫖话罢清藻芊乒残煳攘觳帽s雷ㄕ匣考易宀惺堋精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸序列握纤靥匾煲楸鸬幕颍叨缺J兀存在于许多病毒的农面,因此位于细胞表面的憋合素成了许多病毒的受体,如轮获隳毒⑾啡橙扯、罄分秘瀵病毒。“取Mθ觳《珻是一种肠道病毒,属于小《究疲丘逭钚匝氏垦住⑹肿憧诓⒘餍行孕赝础心肌炎、心包炎等的病原体,分为两组。有研究报邋,可以通过柯萨奇以及寝变加速因子,与靶细胞结合。其中柯萨奇椴《型珻一利用挞会素魑K肭通过際赴岷希渲衛、型在与靶细胞结合的过程中,餐⒒恿俗饔茫瘸鯠介导病毒吸附予靶细胞,褥瞧徊浇榈疾毒内纯“’“。在对躲瘸毒韵研究中已发现,豫瘸毒怼靶细稳鹩感染分为霾街瑁吸附和内化,前者主要通过榈迹纤丌颉汀雙诤笠唤锥沃蟹⒒了作髑。虽然,整会素、艱三者在树萨奇病毒的感染过程中都超到了一细胞表面受体悬细胞与胞外环境之障嗷ソ涣鞯囊槐庵匾C呕АU纤作用,参与生物体的多种生理和痫理过程,如器官发生、细胞增殖、分化,伤口薅毒耪藤瘸毒共溺爱体狝,、整合素宿主缭膣豹受侮““”。穗萨惫翰《珻一本定酌圣茫Χ哉纤睾推溆喽唪鸸叵灯骶蹭嫖廾魅繁1ǖ馈言
在众多的整合素家族成员中,整合素惴翰斡肓硕嘀植《径运拗飨赴细胞系由本教研室保存,培养基为含%牛血清的一谷氨酰胺和/青链霉素条件下培养,按常、、、、、由本教研室提供,一。4妗鼠抗人整合素タ寺】固骞鹤訡产品编号。将细胞传代至培养瓶,待其长成单层细胞后,以的浚崆嵋』闻嘌浚共《疽河胂赴浞纸哟ィ赴中,期间每分钟摇晃培养瓶一次。后,吸弃上清液,加入无血清,/瓶,于的感染过程,为了了解柯萨奇椴《臼欠窭谜纤豤【。作为它与宿主细胞吸附的受体,以及病毒与整合素的结合是否也通过蛄薪榈迹颐怯貌煌度的包含蛄械暮铣啥嚯暮涂拐纤豠,&单克隆抗体獗誋胞表面的相应位点,再用一感染细胞,通过观察细胞病变的程度来进行初步的研究。材料与方法钩规方法传代。《饕J约干粉为静贰合成多肽购自产品编号┰霾《次备用。,分别用无血清稀释倍后,中培养,待%上的细胞出现保唇赴冢反复冻融危肿埃保存。《镜味将细胞传代至孔细胞培养板,×鱿赴軱,待其长成单层后赴加入培养瓶,置
嚷辩病海,在瑟鸯熬巍凌热入含ィ琹、孛盘渍懿维挎滚,荇耍孔中至少壮鱿諧的细胞所对应的病毒稀释度作为以次备用。晕扪G直鹱麇逍断∈停释凄麓瘸霉,恳徽槭推喾令复魏,奁第列备琵内葫灭无斑维持液,黉。中壤养鸩扃晕茸棠褻魏滂援,懿畎甊翻撬蹩会素,§。荤克隆撬豁攒剃篝闔д将细胞按个细胞/孑尤装逯校琹甶/孔,特其长成单屡细胞后以次备用。含暮铣啥嚯挠梦扪G直鹣∈椭痬/,获整台紊。。擎竞隆撬锩薅无盎潘分裂穗黪至痬痬T装迥诜直鸺尤胂∈秃蟮亩嚯暮涂固澹軱,每一稀释度做龈纯祝溆嗫啄诩尤胛扪G/孔,置磊,吸去毳蠹滚落,在多获魏、撬镩强窝羯毪瓣照我内