文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
组织工程化骨的构建及骨修复作用的研究
姓名:何川
申请学位级别:硕士
专业:外科学(骨外科学)
指导教师:邓廉夫

橹こ碳际醯姆⒄刮=饩龉切薷凑庖涣俅材烟馓峁┝艘桓龀渎是构建组织工程骨,特别是大型工程骨组织的关键环节/本课题拟从三谝徊糠窒赴痪垡掖妓复合物微重力旋转培养的研究摘要组织工程化骨的构建及其骨修复的作用、,望的新途径,其基本方法是在体外构建类似自体骨的组织结构,然后植入病人体内。工程化骨组织的两个基本组成部分是支架材料和种子细胞,但现在研究中应用的支架材料和种子细胞由于种种缺陷,尚不能满足临床使用的要求。此外,细胞种植于支架和体外培养细胞一支架复合物也维培养技术、种子细胞和支架材料三方面对骨组织工程的相关问题作初目的:观察微重力旋转培养系统对细胞种植于支架和细胞一支架复合物体外培养的影响。方法:分离培养兔皮肤成纤维细胞,实验用第痗支架的密度细胞后计数,了解细胞吸附情况;嗤赴芏染仓菇又值南赴镜观察细胞生长、基质形成及其细胞与宋岷献纯龅谋浠=峁动态接种组细胞吸附量随时间延长而逐渐升高,在∈焙竺飨愿哂诰中文摘要步探讨,为进一步研究打下基础。代细胞。直鹩镁仓菇又趾投又址绞揭接种于埽仓菇又旨吹渭酉赴河赑网架上,动态接种是把细胞悬液与苤糜谛O赴嘌低,=又郑直鹩、、、小时消化下网架上一春衔锓直鹬糜谛E嘌低澈途仓固跫屡嘌贗、、、、、天ḿ觳庀赴鲋常挥玫怪孟嗖钕晕⒕岛蜕璧止组;培养苤行W橄赴鲋晨煊诰仓棺椋赴谕苤械姆植家比静止组均匀。旋转组细胞胞外基质分泌活跃。上海第二医科大学硕士学位论文,\。
第二部分以诱导下成骨型成纤维细胞为种子细胞构建组织工程化骨的研究目的:探讨诱导条件下的成纤维细胞作为新的骨组织工程种子细胞后种植于苌希刑逋庑E嘌⒂煤琓/.痬的条件培养液进行诱导。利用倒置相差显微镜、扫描电镜、四环素荧光标记、茜素红染色方法观察细胞生长、骨样组织形成和矿化物沉积情况。上清液生化检测分析成骨性标志物分泌情况。结果:三维支架上的成纤维细胞表达成骨表型,分泌成骨细胞特征性标志物:骨钙素凸翘匾煨约钚粤姿崦:分泌大量细胞外基质第三部分纳米复合材料为支架构建组织工程骨的研究实验一纳米复合材料为支架培养成骨细胞的研究生物学行为的影响。方法:原代培养犬皮质骨成骨细胞并扩增,通过形态学和组织化学方法鉴定。收集第晒窍赴种灿趎Ъ苌希然后旋转培养,通过扫描电镜观察和上清液分析了解细胞生长、胞外基结构的细胞外基质,上清液生化分析显示:成骨细胞分泌大量的骨特异实验二自体成骨细胞~复合物对犬骨缺损修复作用的研究目的:探讨搭载自体成骨细胞的纳米材料在体内的组织反应性和骨修复作用。方法:在四只犬的双侧胫骨各制作一直径的单侧皮质骨缺损,在所有犬的一侧胫骨缺损中放入种植成骨细胞的支架作为实验组,其余缺损两只犬填入自固化磷酸钙砹街蝗钊敫春螧的可行性。方法:用酶消化法从兔皮肤获得成纤维细胞,体外培养扩增形成骨样组织。目的:探讨活性玻璃/胶原纳米复合物在体外对成骨细胞质沉积和成骨表型维持情况。结果:成骨细胞吸附于载体上并形成三维性碱性磷酸酶.、骨钙素虸型胶原,且分别在天和天达到分泌高峰。欤上海第二医科大学硕士学位论文
有厚纤维组织条带包裹。厂矿旌天注射四环素标记新生骨,术于体外构建组织工程化骨组织;来源丰富、容易获得的成纤维细胞在诱成骨型细胞的种子细胞源;由材料构成的支架为成骨细胞吸附和维持其成骨功能提供良好的界面和生物环境,在体内既有生物活性又可降解,可用于组织工程化骨的支架材料。有必要迸一步研究探讨将这三的异种骨作为对照组。在处死前后当天和第苌鉿片,骨修复术后满艽λ廊⑷‰止亲鞑煌迅坪脱钙切片检测。结果:呒觳槭緉Ъ苡胫芪Ч亲橹芸烊诤希界限模糊;两对照组骨缺损界限仍清晰。支架内大量新骨组织形成,而在鸵熘止侵踩胱樾律侵怀粱谥踩胛锏谋砻妫珻周围结论:旋转培养是体外培养三维细胞一支架复合物的有效技术,可以用导条件下能够向成骨型细胞转化,形成骨样组织,有希望作为一种新的者结合起来构建组织工程化骨的可能性。关键词:骨组织工程,成纤维细胞,旋转培养系统。纳米材料骨修复、,,一’上海第二医科大学硕士学位论文
—————————————————————————————————————一篢甅:瓵瑂—,痵上海第拼笱妒垦宦畚。,甀—瑂,甌,籇—/甌瓺甊:.
Ⅲ狝甅:,甌,,.篎—琲甋:,.猘痗琯上海第二医科大学硕士学位论文·
痗,—甊:.,瑀瓻—甇瑃’.,
築,甌.,.—瓼.—.甀甀籉;:;上海第二医科大学硕士学位论文籇
正文言引程中的两个基本问题一一支架材料和种子细胞一一目前仍未解决。科、口腔和整形外科临床工作中经常遇到的难题。据统计,美