实验三基因的PCR扩增技术ppt课件.ppt

文档介绍：实验三
基因的PCR扩增技术
一、实验目的
学****PCR反应的基本原理与实验技术
从BCG基因组DNA中PCR扩增Rv1791(PE19)基因
二、基本原理
PCR类似于DNA的天然复制过程。
将待扩增的DN***段与其两侧互补的两段寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增倍数可达2n倍。
体内DNA的复制
DNA聚合酶
dNTP
解旋酶类
引物
5’
3’
加热
变性
复性
复温
DNA的变性和复性
加热或强酸、碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为 DNA的变性。
解除变性的条件后, 变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性, 也叫退火。
PCR扩增原理
引物
延伸
延伸
5’
5’
3’
3’
变性、退火
变性、退火
四、实验步骤
引物设计
准备PCR反应溶液
PCR扩增反应
结果检测
Rv1791-F: ATGAATTCAGGAAGACAGCATGTCGTTC(EcoR I)
Rv1791-R:
TTCAG
(XhoI)