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二0 年月
脑干损伤诊断中的作用研究大鼠脑和’的表达变化在原发性硕士研究生:吴雨虹导师:王慧君教授摘要原发性脑干损伤通常是指暴力作用于头部引起脑干为主的损伤,并于伤后立即发生持续时间较长的意识丧失乃至死亡。脑干损伤的类型包括脑干横断、挫裂、挫伤出血、弥散性轴索损伤退椎龋愿伤鹕说男翁Ц谋溆肫浠苷习牟煌叫允悄愿损伤的最大特点和表现。往往在脑干的形态学改变并不明显时,机体己发生死亡。由于脑干损伤后死亡率较高、死亡者伤后存活时间短,伤后症状和其它类型颅脑损伤存在交叉,一般影像学检查以及死后常规病理学诊断常难以确定脑干是否存在损伤,使其在临床医学诊断以及法医学诊断中存在很大的困难。目前对于颅脑损伤后迅速死亡者的法医学鉴定仍然缺乏早期快速的诊断指标,因此,寻找确凿的脑干损伤早期病变的依据,成为确定是否脑干死的重要手段。大量研究表明,月运鹕擞懈叨鹊拿舾行约疤匾煨浴属于钙结合蛋白,在哺乳动物中枢神经系统中,主要由神经胶质细胞合成和分泌,特别是星形胶质细胞和少突胶质细胞,具有脑特异性。当颅脑损伤时,。早在年等就证明,,使其升高较正常兑陨稀4送猓琁,許蛋白的表达亦有促进作用。同时,鞍鬃陨硪部纱俳切蜗赴姆蚀蟆⒃鲋常佣嗟腟蛋白,形成正反馈调节。另外,谕阉枨什⒃硕窬2多发性硬化、格林一巴利综合征癆病中亦出现高表达。但是,鞍自谠⑿阅愿硕士学位论文丫
损伤中的基因及其蛋白表达情况,至今尚未见报道。是反应脑干损伤的灵敏指标之一。目前对其应用于颅脑损伤以及脑干损伤国外已有报道,认为其在诊断早期颅脑损伤诊断方面,是一个可靠的标记物。但国内对鞍自诼砸约澳愿伤鹕酥械淖饔萌聪视斜ǖ溃乇鹗窃谀愿伤鹕酥械淖用,无人提及。因此,本研究致力于①调查鞍自谀愿伤鹕嗽缙谡锒现械作用;②同步研究在原发性脑干损伤中的作用、与鞍妆泶锏墓叵怠及其与损伤时问的关系,为脑干损伤时间的推断提供参考依据。综合现有文献,本研究在我们前期研究建立的脑干损伤动物模型的基础上,采用常规病理染色法观察脑干损伤形态学的改变,同时通过实时荧光定量免疫组织化学等技术,观察脑干损伤后虶谋泶锉浠蕴剿髌湓原发性脑干损伤诊断及时间推断中的意义。按照课题设计,本研究分为三部分。实验方法及实验结果如下:愿伤鹕硕锬P偷慕⒑筒±硇翁Ч鄄自制动物模型装置,主要有铁支架、引导管、打击物及木板组成。实验动物为只雄性大鼠,重量为,采用/下热疜腹腔注射麻醉大鼠,使大鼠俯卧于底座上;调整引导管对准枕骨粗隆,并观察呼吸和心率等生命体征的改变。让打击物从引导管的处自由下滑打击大鼠,作用力的大小表示为//。,每只大鼠只打击一次,其中淮笫蠹刻死亡未计入组内。生前损伤组只,其中谒劳稣唬俏D愿损伤死亡组;只存活分别于伤后、、、处死,记为伤后存活组,每组只;正常对照组只不进行打击直接处死。所有处死大鼠均取脑干组织。结果:所有实验组大鼠均可见蛛网膜下腔出血明显,脑干组织水肿,脑干中文摘要胶质纤维酸性蛋白珿,是星形胶质细胞的主要细胞骨架蛋白,也是特异性标志蛋白,正常情况下,对神经细胞起支持及代谢作用。脑干损伤后,星形胶质细胞即可发生增殖反应,出现明显的功能活跃,并于脑干损伤早期即有快速反应,
内见散在的点片状或椭圆形小片状出血,伤后谒劳稣叱鲅2课唤衔9泛,数量多,伤后存活者,出血数量相对较少。痉⑾侄哉兆榇笫竽愿组织轴索排列规整,走行一致,轴索间隙均一。谒劳龅拇笫竺致苑植的轴索肿胀、断裂、扭曲呈蚯蚓状,术端膨大,轴索间隙增宽。伤后、组在脑干见到上述轴索损伤变化更加明显,以轴索断裂、肿胀及扭曲为主。伤后晒鄄斓揭蛑崴鞫狭押笾峤鞒龅侥宰橹植克纬傻闹崴魇账跚颍轴索收缩球数量增多,体积增大,至J技跎佟凳庇ü舛縋法检测脑干组织中表达变化实验对象从上述各组中随机抽取,每组弧Q细癜凑帐约梁械牟僮鞑街杞行。结果:与对照组比较,谒劳鲎榇笫竽愿勺橹蠸挥邢灾性差异;伤后组脑干组织中甿灾档停笏媸奔涞难映ぃ达逐渐升高,并于锏礁叻澹基本降至正常水平,泶镉胝6哉组亦无显著差异。庖咦橹Х椒ḿ觳饽愿勺橹蠸和的改变正常对照组可见粜匀旧ň确植荚谛切谓褐氏赴寮巴黄鹬小劳鲎楹蜕撕蟠婊钭、、可见大量阳性细胞表达,伤后存活组愿勺橹谋泶镉胝6哉兆槲尥臣蒲Р钜臁下常对照组分布在星形胶质细胞的胞浆及突起中。伤后劳鲎镚泶镌銮浚的细胞形态变得不规则;随时间的延长阳性表达逐步上升,至泶锟J枷降。根据以上研究结果,我们得出以下结论:捎蒙鲜龇椒ㄖ谱鞯哪愿伤鹕硕锬P停怯猛饫椿底饔昧χ苯幼饔于颅骨,能准确的打击大鼠枕骨粗隆,可以较好的模拟人体真实状态下的颅脑损伤情况,且操作简单,易于评价,可用于脑干损伤的发生机制、病理生理改变及损伤后果等方面的研究。硕士学