文档介绍：Western Blot结果条带全面分析

原因:比较多,如果单纯一张没有任何显色,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。
解决办法:仔细检查抗体是否加错,确认转膜没有问题。上面的图片展示的是一点信号都没有,如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带,可能原因是蛋白上样量太少,一抗浓度过低,显色液失效。另外如果转膜出现了问题,比如膜放反了,自然是一个白片。

原因:封闭不够好,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够。
解决办法:降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数。

原因:一抗非特异性与蛋白结合
解决办法:更换一抗

原因:电转中膜和胶之间存在气泡。
解决办法:转膜前去掉膜和胶之间的气泡
 
原因:膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合
解决办法:封闭结束之后要洗。

原因:蛋白量太大,一抗浓度和时间太长
解决办法:根据情况调整蛋白量,同时一抗浓度和时间也可以缩短。
7. 出现非均一性背景
原因:膜可能曾经干过
解决办法:在每一步的操作过程中,都需要注意不要让膜干。
 
原因:SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒
解决办法:配胶过程中要小心,使用无杂质的液体。另外配胶用的水,SDS,Tris缓冲液要注意不要有杂质。
9. 条带呈哑铃状
原因:配置胶有问题,胶凝固后不均一
解决办法:把胶配好,不合格的胶坚决不用

原因:电泳电流不均一
解决办法:换用新的电泳槽; 不使用两边的两孔
其他问题
(1)蛋白分子量偏高或者偏低。可能是胶