文档介绍：基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究
[摘要] 目的:建立快速准确的头花蓼与尼泊尔蓼药材的分子标记鉴定方法。方法:通过RAPD随机引物筛选,获得头花蓼特异的RAPD 分子标记片段,经克隆、测序,重新设计特异性引物转化形成稳定的SCAR标记。结果:获得2条稳定扩增的头花蓼特异片段Z300,Z1100,根据该2特异片段序列设计4对特异引物,分别对头花蓼与尼泊尔蓼药材DNA进行扩增,其中引物Z1-2可从头花蓼药材中扩增获得约300 bp 的片段,而尼泊尔蓼药材则未扩增出该片段。结论:引物Z1-2成功将Z300片段转化为SCAR分子标记,可作为头花蓼与近缘种尼泊尔蓼药材分子鉴定的依据。
[关键词] 头花蓼;尼泊尔蓼;近缘种;SCAR 标记
[收稿日期] 2012-12-21
[基金项目] 国家“十一五”科技支撑计划项目(2009BA174B01);贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教科2008026);科技创新公共技术平台建设项目(2010筑科合字第3-2号)
[通信作者] *周涛,教授,研究方向为分子生药学,E-mail:taozhou88@ 头花蓼 Polygonum capitatum Buch- P. nepalense (Sect. Cephalophilon Meisn.)[1],其药用具有地区性,在我国西南地区多用于治疗风湿痹痛等疾病[2]。其中,头花蓼自20世纪90年代以来,作为贵州特色苗药的代表,既是多个治疗泌尿道感染的中成药制剂原料[3-4],也建立了GAP的规范化种植基地,开展了种质资源评价与优良种源筛选工作。但就目前而言,头花蓼的栽培资源尚难以满足产品对原料的需求,野生资源仍是其药材主要来源,由于头花蓼以全草类入药,药材干燥皱缩,极易破碎,在头花蓼药材的市场收购中,出现了同属近缘种如尼泊尔蓼植物掺混现象,造成头花蓼药材使用混淆。从头花蓼、尼泊尔蓼的本草、临床使用来看[2],二者虽多用于治疗风湿痹痛等疾病,但在功能与主治上有不同侧重点,头花蓼功效上偏重于利尿通淋,主要治疗泌尿道感染、肾盂肾炎;尼泊尔蓼则偏重于治疗风湿痹痛之症,主要用于咽喉肿痛、赤白痢疾、风湿痹痛等症。因此,准确鉴定头花蓼药材,避免采收、生产上的伪品掺杂是确保头花蓼临床疗效可靠的关键。
近年来,运用DNA分子标记方法开展中药材品种鉴定、药用植物种质资源评价及其辅助育种等方面的研究已有大量报道[5-6]。序列特异扩增区域(sequence charactered amplified region)标记技术即是在随机扩增多态性RAPD(randomly amplified polymorphic DNA)技术基础上发展起来的一种可靠、稳定的分子标记,它是基于对基因组进行RAPD分析后,将RAPD目标片段进行克隆测序,再对片段设计特定引物,以此引物对基因组DNA再进行PCR特异扩增,可将与RAPD片段相对应的单一位点鉴别出来[7-12]。SCAR标记具有更高的重现性,克服了RAPD重复性欠佳的弱点,并可以将显性标记转化为共显性标记[13],可借鉴应用于传统性状鉴定、理化鉴定等方法难以解决的皱缩、破碎全草类中药材的近缘品种鉴定中。本文在RAPD分析工作的基础上,采用SCAR 标记技