文档介绍：1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里,放入恒温烤箱中加热至180℃后,干烤2小时。2、取X克培养基放入X克蒸馏水,放入高压消毒锅中加热溶化,冷至45℃时,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,每皿约15ml。3、待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。4、采样时,一般在100级层流罩中放置3个培养皿,在100000级,10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖,,再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养,时间不小于48小时,—。5、将培养皿举起用肉眼直接计数,用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏,若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,分辨时仍以2个或2个以上菌落计数,不要漏计培养皿边缘生长菌落,并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。6、沉降菌测试前,被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内,测试状态有静态和动态两种,测试状态选择须符合生产要求,并在报告中注明测试状态。7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服,静态测试时,室内测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始,对非单向流,100000级以上净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。8、平均菌落数计算:M1+M2+M3平均菌落数=n—培养皿总数M1—1号培养皿菌落数M2—2号培养皿菌落数Mn—n号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准,(100级≤1个;10000级≤3个;100000级≤10个)。若某洁净室内平均菌落数超过标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均须合格。人员进出洁净生产区的一般程序:换鞋脱外套穿工洁作净服气或吹闸空淋室气室洁净生产区手消毒洗手进单旁门向通出人员进出无菌操作洁净生产区程序:洗脸手腕手消毒手消毒穿无菌外衣换无菌鞋无洁菌净操生作产区气气闸吹室淋或室空穿无菌内衣脱内衣脱外套换鞋进出无菌医疗器具洁净室环境要求及监测:监测项目技术指标监测方法监测频次 100级10000级100000级300000级温度(℃)18℃—28℃1次/班相对湿度%45~651次/班水平层流风速m/s≥——————JC垂直层流1次/月≥——≥20≥15≥121次/月静压差Pa不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间≥5洁净室与室外大气≥101次/月沉降菌数≤1≤3≤10≤15GB/T16294-19961次/周无菌检查法试验步骤无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行,其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。1、器具灭菌:培养皿若干个(报纸所好)、试管、剪刀、镊子等装入盒中置电热干燥箱内180℃,2小时。2、硫乙醇酸盐流体培养基(细菌),根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水,煮沸,摇匀,分装至适宜的容器中,瓶塞封口,灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养48小时,应无菌生长。改良马丁培养基(真菌),根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水,煮沸,摇匀,分装,灭菌。改良马丁培养基置24℃培养72小时,应无菌生长。营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml,分装几个皿来计算,灭菌。%***化钠分装至7支试管,封口,灭菌。3、把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下,%***化钠试管中摇匀,作10倍系列稀释至10-7,然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml,分别放入标号5#、6#、7#培养皿里,倒入营养琼脂摇匀,(营养琼脂不能太烫,以不烫手为准)待营养琼脂冷却后倒置放入33℃培养箱中培养48小时,48小时中取出观察计数,根据菌落数小于100cfu来决定用几号。4、操作时,应用适当的消毒液对供试品表面或外包装擦拭消毒后,以无菌方法取内容物。取供试品3只接种于足以浸没供试品的适量培养基中。一只瓣膜接种于硫乙醇酸盐流体培养基中,轻轻摇动,使瓣膜与培养基混合,1支试管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml,作阳性对照,1支作空白对照。另取2只瓣膜接种于改良马丁培养基中,2支试管作空白对照。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养,改良马丁置24℃培养阳性对照管培养48小时后应有菌生长。5、结果判断:在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。培养14天后,若供试品管匀澄清,判供试品符合规定;若供试品管中任何一管显浑浊并有菌生长,判供试品不符合规定。细菌内***试验步骤:1、准备工作:移液管:,1ml10支试管:10ml×4支,试管架2个(大小)烧杯40ml2个,锥