文档介绍：第一章绪论药学一级学科分类:药物化学、药剂学、药理学、药物分析、生药学及微生物与生化药学二级学科★生物技术与生物技术药物的概念生物技术药物的分类按用途分类:治疗药物、预防药物、作为诊断药物(免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体(McAb)、诊断用DNA芯片)按作用类型分类:细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、RNA干扰(RNAi)药物、基因治疗药物按生化特性分类:多肽类药物、蛋白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇(PEG)化多肽或蛋白质药物★生物技术药物的特性理化性质特性:相对分子量大、结构复杂、稳定性差药理学作用特性:活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性生产制备特性:药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目标产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染质量控制特性:质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定(原液、半成品及成品检定等等)第二章基因工程制药蛋白类药物的特点:结构确证不完全性、具有种属特异性、多功能性、免疫原性临床前安全性评价的特殊性:蛋白类药物安全性担忧的性质和来源;受试物的纯度;相关动物的选择;给药剂量的选择;免疫原性;遗传毒性和致癌性(一般不进行常规的遗传毒性实验);药代动力学真核细胞表达制品的安全性问题:生产细胞DNA残留的影响、生产用血清的影响基因工程药物稳定性研究的相关问题:药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、pH基因工程药物的缺陷:生物利用度低,半衰期短;异体蛋白具有免疫原性基因工程菌的修饰改造方法:构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰(降低免疫原性、增加水溶性、延长t1/2)基因工程制药基本环节上游阶段:制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞下游阶段:培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装基本工具:目的基因、各种酶(切割酶、连接酶、修饰酶等)、载体、宿主细胞酶切结果:5’粘性末端、3’粘性末端、平头末端1U核酸内切酶的酶活性:指在最佳反应条件下反应1小时,完全水解1mg标准DNA所需的酶量影响限制性内切酶反应的因素:DNA样品的纯度:DNA的甲基化程度:核酸限制性内切酶不能够切割甲基化的核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒DNA。酶切反应的温度DNA的分子结构反应缓冲液组成反应时间、反应体积等工具酶核酸限制性内切酶:识别、水解外源的双链DNA分子上特定的核苷酸序列。主要存在于原核微生物中。同裂酶:指来源不同,识别序列相同的酶;进行同样的切割,产生相同的末端同尾酶:来源不同,识别序列不同,但产生相同的粘性末端DNA甲基化酶:具有宿主专一性,对宿主自身DNA上特定核苷酸进行甲基化修饰,避免被自身限制性内切酶水解DNA连接酶T4噬菌体连接酶:连接双链DNA切口,或带粘性末端或平头末端的DNA片段大肠杆菌DNA连接酶:连接双链DNA切口,或带粘性末端的DNA片,不能连接带平头末端的DNA片段聚合酶:以DNA或RNA为模板,将核苷酸连续加至3’-OH末端,合成方向为5’→3’。DNA聚合酶、RNA聚合酶大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ:5’→3’DNA聚合酶活性;5’→3’DNA外切酶活性;3’→5’DNA外切酶活性;RNAH酶活性Klenow酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性T4噬菌体DNA聚合酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性。外切酶活性比Klenow酶强200倍,对单链DNA作用强于双链DNAT7噬菌体DNA聚合酶:不具备5’→3’DNA外切酶活性TaqDNA聚合酶反转录酶:催化以RNA或DNA为模板,合成DNA;具有RNAH酶的活性末端脱氧核苷酸转移酶:催化dNTP沿5’→3’聚合,逐个加于线性DNA分子的3’末端;不需要模板载体:(vector)来源于质粒、噬菌体或病毒的DNA分子,可供插入或克隆目的基因或DNA,并具有运载外源DNA导入宿主细胞的能力。质粒载体:cDNA);开环DNA(ocDNA);线状DNA(lDNA)质粒的三个重要性质:遗传传递的能力;遗传交换的能力;不相容性用于克隆的质粒的三个要素:复制子、选择标记、多克隆位点常用质粒载体:克隆载体、表达载体、突变载体、报告载体λ噬菌体载体:插入型载体、置换载体来源于噬菌体DNA,因可以插入较大DNA片段,常用于构建基因组文库和cDNA文库。目的基因的常用制备方法化学合成法:前提:基因的DNA的序列已知。小于100bp的片段:直接合成,最常用固相亚磷酸三酯法。大片段目的基因:小片段粘接法、大片段酶促法PCR法:前提:已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列,根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物。基因文库法:鸟枪法:适用于原核细