文档介绍：浙江理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。年学位论文作者签名:程菊会日期:
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尚弘理乒大学硕士学位论文多重荧光奔觳多种马铃薯病毒学科ㄒ中国杭州作者姓名程菊会生物化学与分子生物学指导老师姜永厚副教授所在学院生命科学学院提交日期年日
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多重荧光奔觳多种马铃薯病毒论文答辩日期年日答辩委员会主席刘小川教授论文评阅人ど丁先锋副教授答辩委员会成员李素芳研究员姜永厚副教授徐涛副教授分类号:密级:浙江理工大学硕士学位论文
摘要马铃薯是一种重要的世界性粮食作物,马铃薯病毒病是马铃薯非常重要的一类病害,分布于世界各马铃薯种植区,其中一些马铃薯病毒会严重影响马铃薯的产量和质量。马铃,砹迨鞽病毒琍砹迨,马铃薯《薖吐砹迨鞸病毒琍茄现匚:ξ夜砹迨聿康种主要病毒。实时荧光定量墙攴⒄蛊鹄吹囊恢质凳倍考觳夂怂岱肿拥男录际酰是最常用的一种非序列特异性的荧光染料,被广泛地应用到实时荧光定量中,本研究采用一种新型的荧光染料,的原理同谎通过观察荧光强度的变化对整个探惺凳奔觳猓萑劢馇叨晕粗Q方卸性分析,同时通过标准曲线来对标准样品中的核酸分子进行准确的定量分析。相訮扩增的抑制作用很小且不容易产生非特异性扩增,更为显著的是,较高浓度的消除了谥谱魅劢馇呤彼3鱿值摹叭玖现胤植的缺陷,因此,更适用于多重实时荧光;贓挠ü舛縋方法与其它类型的定量方法相比具有简便易行、成本低廉的优点。本研究首先建立了致砹迨聿《镜腅ブ厥凳庇ü舛縋方法,、、蚉这致砹迨聿《镜牡ブ厥凳庇ü舛縋方法相关系数均大于┰鲂史直鹞#篜、、蚉的特异性试验均无非特异性扩增。灵敏性试验表明,种病毒椒ǖ募觳饬槊粜苑直鹂纱铮篜拷贝仙拷拷贝/“笛榻峁砻鳎种病毒的单重实时荧光定量椒ň哂辛己玫奶匾煨浴⒘槊粜院椭馗葱浴在建立植《镜腅ブ厥凳庇ü舛縋的基础上,我们将植《镜囊物混合放入同一个荧光苤校种病毒扩增产物值的不同,建立多重实时荧光定量椒ǘ哉种病毒进行检测分析。多重实时荧光ü解曲线分析可以区分植《荆颐侨范种马铃薯病毒扩增产物的值分别为:灵敏性实验结果表明,多重实时荧光从υ诘ザ兰觳飧鞑《臼保琍的灵敏性可以达到奖聪蒐,蚉牧槊粜钥梢源锏拷贝仙琍和的灵敏性可以达到奖矗癓。实验结果表明,植《镜亩嘀谽凳庇ü舛薯卷叶病毒《比贝/“..、.。、
关键词:马铃薯病毒检测,,多重实时荧光定量劢馇叻治应用建立的多重荧光定量觳鎏锛溲罚种病毒的阳性检出率最低为%,ü舛縋.%猜缘陀谄胀≒方法的阳性检出率.%ḿ灾谑×思觳獬杀竞褪奔洹W苤狙芯砍晒致砹迨聿《镜腅ブ厥凳庇ü舛縋方法以及多重实时荧光定量椒ǎ梢远哉种马铃薯病毒进行定性和定椒ň哂薪虾玫奶匾煨浴⒘槊粜院臀榷ㄐ浴了、、蚉量的快速检测。Ⅱ
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