文档介绍：基因工程与基因敲除
基因重组
是指在体外用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接,组成一个新的DNA分子的过程,又称DNA重组。
基因克隆
将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中,使其扩增和繁殖,以获得大量的同一DNA分子,称此为基因克隆、DNA克隆或分子克隆。
基因工程目的:
①分离获得某一目的基因或DNA
②获得目的基因的表达产物(蛋白质)
基因工程
实现基因重组和基因克隆所采用的方法和相关工作,统称为重组DNA技术或基因工程。
重组DNA技术的基本流程
目的基因的获取;
克隆载体的选择和处理
外源基因与载体的连接
重组DNA导入受体菌
重组体的筛选
本节主要内容
一、重要的工具酶
二、基因克隆常用的载体

三、重组DNA基本原理
四、重组技术在医学和制药工业中的应用
五、基因工程制备敲除鼠文献解析
一、重要的工具酶
工具酶
主要是指用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转录等有关的各种酶系统。
工具酶
限制性核酸内切酶
DNA聚合酶
逆转录酶
DNA连接酶
碱性磷酸酶
末端转移酶
(一)限制性核酸内切酶(RE)
是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶,简称限制酶或切割酶。
根据限制酶的作用特性,一般分为三类:
——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型,
其中常用的是Ⅱ型限制酶。
限制酶(Ⅱ型)识别及切割位点
特异识别及切割48个bp长度且具有回文序列的DNA片断,主要产生3种缺口: 5ˊ-粘性末端
3ˊ-粘性末端
平端或钝端
回文序列
是指该部位的核苷酸序列呈180O旋转对称;
粘性末端
是指经内切酶特异切割后产生的5ˊ-末端突出或3ˊ-末端突出的碱基序列相互具有互补性。
⑴产生5'-粘性末端
⑵产生3'-粘性末端