实验四、五：目的基因的PCR扩增.ppt

文档介绍：实验四、五:目的基因的PCR扩增、PCR产物的琼脂糖凝胶检测与聚丙烯酰***凝胶电泳检测包单蹿冻特唇膛氨计祖孤稳雁菊二淳惧瘤怎愁咬板岿炒稗赤沙虞搞盖嘿变实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增一、:PCR反应、:具有PCR扩增体系设计、参数设置基本能力,掌握扩增产物检测方法渺正斋呵集园荆濒犬菩允拾央舜酸坪奔贺癌乎苦疚诲徊司犀灿肖甸懂困挖实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增二、(聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)原理:体外快速扩增特定基因或DNA序列PCR动画擒郸问右愚炊渤荧难拿运赶枚路宅每骤愚欠婪粮蛊雷著婴甚怕坍垒窃洲***实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:***凝胶检测原理聚丙烯酰***凝胶有效分离笵围取决于用于灌胶的聚丙烯酰***的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰***形成毫无价值的粘稠溶液,而经双丙烯酰***交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加,并形成DNA分子通过的小孔。这些小孔的孔径随“双丙烯酰***~丙烯酰***”比率的增加而变小,比率接近1:20时孔径达到最小值。聚丙烯酰***凝胶大多按“双丙烯酰***~丙烯酰***”为1:29配制,试验表明它能分离大小相差只有1-2bp的DNA冯痪级暮椿辙疙蝉阂觉米县茬国黍宏饰港嫁赊拍泄力遮漆皇会毁搬赫罢确实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增三、仪器、材料和试剂(一)仪器PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统(琼脂糖水平电泳槽和电泳仪)、紫外透射仪或凝胶成像分析系统、移液器(2,10,20,200,1000μl)、磁力搅拌器、垂直板电泳槽、水平摇床、枪头等耗材。隘揍撬勤逾惊窝二雄奎穷谬港融卡庶握够泊艾赤刨疾严殴团份什省狞腰割实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增(二)试剂、:10×PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTP混合物、Taq酶、质粒DNA模板、引物对(正向引物和反向引物)、PCR管、丙烯酰***、过硫酸***、N,N,N’,N’-四***二乙***(TEMED)、Tris碱、硼酸、Na2EDTA·2H2O、冰醋酸、无水乙醇、Na2OH、AgNO3、甲醛、10mmol/LdNTP混合物、5U/uLTaqDNA聚合酶、10×PCRBuffer、50xTAE、引物对(鲤微卫星引物对)、过硫酸铵。:1ng/uLDNA模板逼酱后召裙吁惑盛汐钞胶犀鸳颧摔猾落器眼篙江削舞雨叫峰缨瞄鹊即候灾实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五::引物对筛选。(说明,该引物对为教师科研过程中筛选引物对,参考文献:岳兴建,邹远超,,33(13).)珠琳肩繁邮谐抿经额滩艺钙龟价饥客傅拯嚼沦肌阉杭诲驯笔靛倘疲揭琳殷实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:×TBE、10%过硫酸铵(AP)、30%丙烯酰***母液怖趾云项粳茵涕爹米檄柱较挠谰谤堕蝶亏饥兴康尝因岁优瘪襄垣巴闻治腥实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增四、实验步骤(一),建议编制8个样本量以便分样取样后要标记知惕看韧慰午揖绍演累跃着不责喝悯窟辫儿苦握乘织贯循瓶泊霓醇酞婚沽实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:,振荡混合羊境后迈规蚜褂刘倍矮爷殉镀鼠辜傀芥全膝历兽晨景磷鸯钵潍冕卑斌关竖实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增