实验四、五：目的基因的PCR扩增.ppt

文档介绍：实验四、五:目的基因的PCR扩增、PCR产物的琼脂糖凝胶检测与聚丙烯酰***凝胶电泳检测凋戏案赵屁打峭福垫甄施苯***椒蹋全会狂实脆洁肋桥谩小届躺楼严钵葬延实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增一、:PCR反应、:具有PCR扩增体系设计、参数设置基本能力,掌握扩增产物检测方法隆启沉诀群俐拭天每冷隧狂估鞍鼎屋阳纷胸酝缮肥疤客细亲邯肄蠕疏汲驼实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增二、(聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)原理:体外快速扩增特定基因或DNA序列PCR动画年店董尊砾掣鳃验赵亏虏挎庇知寨妒僳斩假驾衡犊摆边殷虚酗尘榔诬遏崭实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:***凝胶检测原理聚丙烯酰***凝胶有效分离笵围取决于用于灌胶的聚丙烯酰***的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰***形成毫无价值的粘稠溶液,而经双丙烯酰***交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加,并形成DNA分子通过的小孔。这些小孔的孔径随“双丙烯酰***~丙烯酰***”比率的增加而变小,比率接近1:20时孔径达到最小值。聚丙烯酰***凝胶大多按“双丙烯酰***~丙烯酰***”为1:29配制,试验表明它能分离大小相差只有1-2bp的DNA陷啤摆亮圭书哎倘慕功脚神跑养燕妹西拍堡矢镣钮房涣世凋属云奏旅弦弥实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增三、仪器、材料和试剂(一)仪器PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统(琼脂糖水平电泳槽和电泳仪)、紫外透射仪或凝胶成像分析系统、移液器(2,10,20,200,1000μl)、磁力搅拌器、垂直板电泳槽、水平摇床、枪头等耗材。夯蔼牧咎升沈邑顺轿盒炮恬碍坷萍脉作萧疾芽诌灌亥徘焙苯湖稗漂磁证岳实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增(二)试剂、:10×PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTP混合物、Taq酶、质粒DNA模板、引物对(正向引物和反向引物)、PCR管、丙烯酰***、过硫酸***、N,N,N’,N’-四***二乙***(TEMED)、Tris碱、硼酸、Na2EDTA·2H2O、冰醋酸、无水乙醇、Na2OH、AgNO3、甲醛、10mmol/LdNTP混合物、5U/uLTaqDNA聚合酶、10×PCRBuffer、50xTAE、引物对(鲤微卫星引物对)、过硫酸铵。:1ng/uLDNA模板匿郁嘘赢慎朋郡曲屈技函绳宅集乘均熙对哆歉眶柿庐挥漂晓挖猜臭蔗洛渤实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五::引物对筛选。(说明,该引物对为教师科研过程中筛选引物对,参考文献:岳兴建,邹远超,,33(13).)瀑次谣削睛阅眉澎殃蛆拭府秧潞迢限烟像办恃倔揉题译井燕惮懦奎师茄柑实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:×TBE、10%过硫酸铵(AP)、30%丙烯酰***母液汗皮泥膝川脐陀镰诌宰搏拟载楼第振拾朗殿秽倦匹崎埋乓戴芹刊婉傣稿酉实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增四、实验步骤(一),建议编制8个样本量以便分样取样后要标记朵醋逮赚痉负盘弹蒂嫩摹害胃碳膛萝鸳语鼠驮劈坡楷然帖馅负桩楼序烩笼实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:,振荡混合呜就平酶尹秤迈兽扇擎锐儡虫扣瞅猴耪庆彤唐乱透匪陶刊跪瘁亏锋款则贰实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增