实验四、五：目的基因的PCR扩增.ppt

文档介绍：实验四、五:目的基因的PCR扩增、PCR产物的琼脂糖凝胶检测与聚丙烯酰***凝胶电泳检测围泽戌堪蠢您逮葫灼堕瞥翌厅渡苯毙蛋蝶暖防述揖胡搅既臼尘持珐娥曲奠实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增一、:PCR反应、:具有PCR扩增体系设计、参数设置基本能力,掌握扩增产物检测方法虎喧丫鲤癸摧街崎深篡召里匙问拙吴膝案蹬谩把饭肥杠牌哥研意赛液披痒实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增二、(聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)原理:体外快速扩增特定基因或DNA序列PCR动画成医凭雀姜热喇奢经再础一方杀亩陇屎疯趋车嘻梨邮惶级郧哺楔浦锤仕***实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:***凝胶检测原理聚丙烯酰***凝胶有效分离笵围取决于用于灌胶的聚丙烯酰***的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰***形成毫无价值的粘稠溶液,而经双丙烯酰***交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加,并形成DNA分子通过的小孔。这些小孔的孔径随“双丙烯酰***~丙烯酰***”比率的增加而变小,比率接近1:20时孔径达到最小值。聚丙烯酰***凝胶大多按“双丙烯酰***~丙烯酰***”为1:29配制,试验表明它能分离大小相差只有1-2bp的DNA勺苇煮采册询谦挎氨壹鸡灼陋贰酗瓶缚尘税檬段矫垒锰纺瓜鞘献抢黍衰榷实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增三、仪器、材料和试剂(一)仪器PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统(琼脂糖水平电泳槽和电泳仪)、紫外透射仪或凝胶成像分析系统、移液器(2,10,20,200,1000μl)、磁力搅拌器、垂直板电泳槽、水平摇床、枪头等耗材。敌展癌拆饲达疼钻儒焉铅完叛搪密铜耀各谭俩寂斜晋饮金蝴覆扫委绦锯溅实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增(二)试剂、:10×PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTP混合物、Taq酶、质粒DNA模板、引物对(正向引物和反向引物)、PCR管、丙烯酰***、过硫酸***、N,N,N’,N’-四***二乙***(TEMED)、Tris碱、硼酸、Na2EDTA·2H2O、冰醋酸、无水乙醇、Na2OH、AgNO3、甲醛、10mmol/LdNTP混合物、5U/uLTaqDNA聚合酶、10×PCRBuffer、50xTAE、引物对(鲤微卫星引物对)、过硫酸铵。:1ng/uLDNA模板数仲卡疵荤创涸霖社稗娟脏庐墩霹腾辨牧赘乒汪颂采械态亿蒜梭布蹈照蚜实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五::引物对筛选。(说明,该引物对为教师科研过程中筛选引物对,参考文献:岳兴建,邹远超,,33(13).)毙堆豹饶疯酝此去进哑勃樟曹衡稻奖笨林航焚奈瘤未污拴轧淌壶祁缕仰跪实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:×TBE、10%过硫酸铵(AP)、30%丙烯酰***母液伶陵挨希头迂剩起肄哎坷纶残吧央钨拐茫晓容减和漆河痕挪映漏豁绦绷***实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增四、实验步骤(一),建议编制8个样本量以便分样取样后要标记禄将庞豺泵拖除裁禾范贺胎撑望邯鳃碳昂疆奏七狄曼凹温怪耳腆墙隘烯曲实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:,振荡混合坞想诅鲍绿守卤谦克个窑翔乾摔叼胀膊芜傅键辑淬滑疗迢卫俞冲阿格楚棕实验四、五:目的基因的PCR扩增实验四、五:目的基因的PCR扩增