文档介绍：浙江大学
博士学位论文
慢性乙型肝炎患者和HBV携带者外周血单个核细胞差异表达基因
的筛选与验证
姓名:唐翠兰
申请学位级别:博士
专业:内科学(传染病学)
指导教师:陈智
20060520
英汉缩略语阹:琹.::膃锄篐啪人中性粒细胞肽:骼”嘣:彘脱氧核糖核酸:毹差异筛选乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒胆微球蛋白基本本地匹配研究工具互补慢性病毒性乙型肝炎篶细胞毒性馨拖赴差异显示技术差异显示:焦磷酸二已酯酒二硫苏糖酵乙二胺四乙酸酶联免疫吸附实验表达序列标签籶甘油醛·∞農眔篐如”篶篋::癳
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第一部分慢性乙型肝炎患者与册咄庵苎5ジ龊讼赴慢性乙型肝炎患者与咄庵苎5ジ龊讼赴差异表达基因的筛选与验证博士研究生:唐翠兰导师:陈智教授中文摘要浙江大学医学院内科学静∽ㄒ消减文库的构建和筛选的复杂反应,所以推测机体对庖叻从Φ幕虻鹘诓钜炀龆瞬煌母腥咀刺达基因的方法,广泛用于寻找疾病相关基因。脑碇饕S辛降悖皇窍踉咏唬乙型肝炎病毒腥境适澜缧粤餍校夜鬑感染离流行区,一般人群的粜月饰.%。慢性腥拘纬蒆携带、慢性乙型肝炎、肝硬化和原发性肝癌,形成不同疾病状态的机制目前还不清楚,但人体对拿庖叻应在不同疾病状态的形成中起重要作用,机体对拿庖叻从κ怯啥嘀只虻骺分析不同感染状态免疫相关差异表达基因不仅可以了解发病机制,而且可以为寻找早期诊断标志,设计新的治疗靶标提供线索。抑制消减杂交技术辍辒瑂且恢旨觳獠钜毂消减杂交步骤去除了两样本之间的共同序列,使两者之间不同的序列得到富集,同时使丰度差别的单链相对含量基本一致,因此灾黾恿嘶竦玫头岫缺泶锊浙江大学博士学位论文
为健康献血员,所有入选者均排除丙型肝炎病毒鞍滩〔《该研究中构建消减文库所用的盎床材料为外周姐单个核细胞者。分析吆驼6哉誔涞牟钜毂泶锘蛴兄诓髀訦牧嫌敕椒异,每组鋈说腞混合后做合成。慢性乙型肝炎与携带者,携带者与正峁异的嘲母怕剩蚧讼跷目獾姆治觥6且种芇来选择性地抑制非目标序列的扩增。从而使差异基因得到指数扩增。尽管有研究表明菇ǖ南跷目獾阳性率较高,但也会有假阳性结果,为进一步排除假阳性,采用斑点杂交筛选消减文摩。眂琍,,所以以来源于的构建的消减文库代表了机体免疫相关差异表达的基因。慢性乙型肝炎与携带者是两种不同的慢性腥咀刺直鸫砹瞬煌拿疫状态,我们选择病人的外周血单个核细胞构建消减文库,从而分析两种不同疾病状态的免疫相关差异表达基因。在我国,大多数携带者是婴幼儿期感染,往往终生携带3扇顺醮胃染后%ツ芤宰韵扌愿窝椎姆绞角宄《荆挥%一%的人变成慢性携带携带的形成机制。砸倚透窝谆颊摺例携带者为浙江大学第一医院的住院及门诊患者。诊断符台《慢性乙型肝炎防治指南》,携带者为非活动性撸例正常对照琀腥荆懦锞剖芳案味拘砸┪镉τ檬贰C坷∪巳外周静脉血,样本采集后马上进行分离及提取NE懦鎏宀常对照组分别进行正向及反向比较,经两轮杂交与┰龊骉,寺」菇ㄎ库,并对克隆进行┰龊虳筛选,选取部分阳性克隆测序,与同源比较,分析其生物学意义。用ń⒙砸倚透窝子胄撸哂胝6哉盏牟钜毂泶锘虻灏江大学博士学位论文
毗与鹕擞盏嫉南稿踔芷谕V陀泄兀┛孜蒊嬷荨癐胙字⒓懊怵钰亟谟能的基因占主导地位·如乖J郊せ梆匕文库。通过筛选。除了一些功能未知的基因和一些未知序列外,在慢性乙型肝炎患者较弑泶镌龈叩幕蛑校嘤朊庖呦喙兀绶烙豠乳铁转运蛋白鞍酌柑逖堑ノ㈨糽蛋白。在携带者较慢性乙型肝炎患者表达增商的基因中,未知功在携带者较正常对照组表达增高的基因中,检查点抑制子鲫邸辳关。在正常对照组较弑泶镌龈叩幕蛑校嘤胙字⒂泄兀绨紫赴樗琷紫赴檎痵取崧晒σ殴齭建立了馒性乙型肝炎和携带者,携带考和正常对照的消减文库,发现一些与炎症、免疫相关的基因,还发现了~些功能未知的基因和未知序列。ü跣史治觥⑽目馍秆⒑怂岵庑蛴胄蛄蟹治觯な盗藄在差异基因筛选研究中是一种灵敏、有效的方法。,静笱Р┦垦宦畚、和。
,Ⅱ防御素,即岬.。即烙卦谡庑┗颊咛迥诔械W胖匾的拭饔谩也属于包膜病毒,僵防街素对淖饔梦醇