文档介绍：第 39 卷分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告第 5 期

2011 年 5 月 11 Chinese Journal of1 Analytical Chemistry 670 674
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DOI
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基于毛细管液滴技术的血液乙型肝炎病毒 DNA 提取
梁广铁王秋平王维刘大渔* 周小棉
(广州医学院附属广州市第一人民医院检验科临床化学技术研究室, 广州 510180)
摘要基于毛细管液滴技术建立了提取血液中乙型肝炎病毒 HBV DNA 的方法方法的基本原理是向
, ( ) 。
聚四氟乙烯毛细管中连续引入油相和水相溶液时由于表面张力作用可以形成稳定的油包水型液滴依次
, , 。
引入含有不同试样的液滴在毛细管中完成进样 DNA 结合洗涤以及洗脱等过程实验表明采用蛋白酶 K
, 、、。,
裂解和提高洗脱温度有利于提高 DNA 回收率优化后的血清 HBV DNA 提取操作在 25 min 内完成回收率
。,
大于 60% 本方法的 DNA 提取量与常规方法相当而相对标准偏差较大 % vs % 本方法具有简
。, ( )。
单快速和低成本的优势有望成为一种微全核酸分析系统样品前处理的有效解决方案
、, 。
关键词微全核酸分析系统; DNA 提取; 液滴; 毛细管; 乙型肝炎病毒

1 引言

微全分析系统是将分析实验室的全部功能集成于一个微型化装置应用于包括分子诊断细胞分析
, 、
[1 3]
等领域~ 用于核酸分析的微全系统主要包括 DNA 纯化扩增与检测等功能单元已报道的多种基
。、。
于微流控芯片平台的微全核酸分析系统显示出了微型化集成化低消耗以及分析快速的优势[4,5] 芯
, 、、。
片微全核酸分析系统也面临一些问题如加工和使用成本高控制复杂等针对这一问题许多研究者
, 、。,
[6 8]
致力于开发低成本微型化核酸分析装置以标准毛细管~ 为反应器的振荡流 PCR 装置为实现低成
。,
本微全核酸分析带来了希望上述装置使用压力差[6] 或微量注射泵[7,8] 驱动 PCR 液滴在不同温度区间往
。
复运动实现热循环反应这种设计减少了温度变化延迟因而可以显著缩短反应时间由于使用标准
, 。, 。
毛细管作为反应器振荡流 PCR 装置具有明显的成本优势这种核酸分析方法面临的问题是未能集成
, 。
核酸提取与纯化因而尚不能实现集成化核酸分析针对该问题本研究基于毛细管液滴技术建立了
, 。, ,
DNA 提取方法并用于提取血液中乙型肝炎病毒 Hepatitis B virus, HBV DNA 本方法利用聚四氟乙
, ( ) 。
烯 PTFE 的疏水特性在毛细管中形成油包水液滴通过向毛细管中依次引入含有不同试样的液滴完
( ) , 。
成 DNA 提取及纯化本方法有望与振荡流 PCR 结合发展成为低成本微全核酸分析系统
。, 。
2 实验部分

实验装置

自行搭建的分析装置(图 1a)有两个温度控制模块每个模块从上至下分别为聚碳酸酯盖板带有毛
,