文档介绍：摘要轮状病毒,舳。汉舫Σ《究轮状病毒属置体。研制以抗原表位为基础的轮状病毒皿单位疫苗,并利用植物作为生物反应器,生产转基因植物—\诤匣颍惶崛∽;蜓滩葜仓曜艿鞍字剩ü鼶、庖呒觳庋橹ち俗;关键词:重组轮状病毒多表位;。轮状病毒基因中与腹泻有关的是其主要外壳蛋白锹肿床《镜闹饕1;ば钥乖芄挥盏蓟宀泻涂疫苗具有重要的实用价值。本论文将克隆的轮状病毒躒基因的重组轮状病毒多表位来替代热不稳定性肠毒素的亚基的部分,与的皿基形成融合基因—,构建了带有信号肽的猂\—ḿ壑参锉泶镌靥濉Mü└司榈挤ㄗ;滩荩钪栈竦帽泶镏刈蛋白的转基因烟草。转基因烟草植株经觳夥治霰砻鳎;蜓滩葜仓昊蜃橹锌杉觳獾因植株表达的重组抗原有免疫原性。将本实验室保存重组质粒稸、根癌农杆菌辞秩日龄的杂花苜蓿下胚轴,经愈伤组织诱导培养、不定芽诱导培养、生根诱导培养,完成转基因苜蓿植株的再生,得到抗性转基因苜蓿植株。转基因苜蓿植株经觳夥治霰砻鳎;蜍俎V仓昊蜃橹锌杉觳到基因;狤、庖呒觳庋橹ち俗;蛑仓瓯泶锏闹刈榭乖忻庖咴浴本研究为研制重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗、转基因植物口服疫苗提供一条新的途径和方法,具有一定的理论意义和应用前景。含有重组轮状病毒多表位的诤匣蛟谘滩葜械谋泶
吉有重组轮状病毒多表位的∈捞迦诤匣蛟谘滩葜械谋泶膍甌..簉琣.,簃,瓸瑀籪籧;,—...·.瑃產甀畐·琾..甌
前言轮状病毒,粲诤舫Σ《究轮状病毒属又名双层病毒,是引起婴幼儿和多种幼龄动物急性腹泻的主要病原体,感染率和发病率都相当高,对人类健康和畜牧业危害较大。由于轮状病毒是一种人畜共患传染病,世界卫生组织的最新报告显示,每年全球大约有万婴幼儿死于腹泻有关的疾病或并发症”T诙镄愿剐褐校晔状伪ǖ览矗澜绺鞯芈叫⑾至性腹泻,欧、美洲各国,澳大利亚,新西兰等各国先后报道有犊牛、仔猪、绵羊、的感染报道,并已发现或分离鉴定了病毒。感染在动物中引起严重经济损失。在我国,仅在新疆:牛、羊、猪腹泻发病率为%死亡率%,椐统计新疆每年因幼畜腹目前,对引起的腹泻尚无特效药物,葡萄糖口服液可用于补充腹泻期间体液损耗,能暂时缓解症状,但不能消除病毒的危害,现有的抗病毒药不能预防或控制轮状病毒感染,也没有可行的化学疗法。传统的疫苗预防效果收效甚微,所以急需研制一种有效预防一。轮状病毒抗原表位亚单位疫苗是将轮状病毒抗原基因中的抗原活性部位串联在一起并插入真核表达质粒中构建而成的,不但能诱生表位特异性免疫应答、提供特异的免疫保护力,而且可以同时预防同一病原体不同阶段或对不同病原体同时提供保护作用。另一方面,由于表位片段小,这样就比较容易在一个表达载体上克隆病原体的多个抗原基因,它避免了将多个抗原基因克隆在同一载体的困难以及可能引起的转录干扰问题。而且也不必构建多个单一质粒进行混合免疫就可充分发挥病原体中各个抗原成分的作用。因此研制这类以抗原表位为基础的亚单位疫苗具有重要的理论意义及潜在巨大的应用价值。此外,传统的轮状病毒基因工程疫苗。多是在大肠杆菌表达系统中表达的目的蛋白。该表达系统在表达轮状病毒蛋白时有一定的局限性,而且由于表达时外源基因较大,一般表达系统都不能满足要求。植物基因转化技术的发展和完善,为该问题的解决提供了新思路,人体可通过简单摄食含该疫苗的植物组织,通过刺激机体黏膜的特异性免疫应答,使机体获得持久的疾病防御能力“S捎诔杀镜土⑽扌枥洳亍⑽扌枰淮涡哉头,使用方便,因此,植物口服疫苗得到世界卫生组织的提倡,开展这方面的研究具有重要意义”R虼搜兄埔钥乖砦晃;〉穆肿床《狙堑ノ灰呙纾⒗弥参镒魑I反应器,生产转基因植物疫苗具有重要的意义。轮状病毒基因中与腹泻有关的是其主要外壳蛋白蛌嗍,是轮状病毒的主要保护性抗原,能够诱导机体产生中和抗体。产肠毒素性大肠埃希氏菌引起的致病因子主要是黏附素和肠毒素。致病菌借黏附素附于宿主小肠上皮细胞定居繁殖,产生肠毒素为一种强有力的粘膜免疫佐剂,已应用于多种病原的免疫研究中“’,但在轮状病毒疫苗免疫中未见相应报道。本实验选择了鞍缀蚔蛋白的高度保守的可诱发高水平山羊、幼驹、鹿、兔、小鼠等性腹泻,我国亦有猪、牛、羊、犬、兔和多种禽类泻造成的损失大约有万元。该病的疫苗,发展疫苗成为当今世界卫生组织呙绶⒄辜苹械闹匾H挝裰Χ舅厥瓜赴δ芊⑸习佣贾赂剐骸。大肠杆菌热不稳定肠毒素作含有重组轮状病毒多表位的.、诤匣蛟谘滩葜械谋泶
体液免疫反应的中和性抗原表位,并且为了增强Υ穑灾刈槎啾砦换蚪薪峁优化。重组轮状病毒多表位抗原基因以热不稳定肠杆菌基因为传输载体,用慕耄圆舅鼗钚浴,箍梢栽銮坑胫脖泶镉谧;植物中的抗原蛋白靶向于粘膜淋巴组织,并且可激发粘膜免疫系统对口服亚单位疫苗的反应“”。通过农杆菌介导法,将重组轮状病毒多表位基因在烟草中