文档介绍：基于胶体金检测方法的蛋白芯片体系的建立
【摘要】目的构建一个检测尿液中HCG抗原的蛋白质芯片初级模型;方法在硝酸纤维素膜上包被HCG单克隆抗体(抗β-HCG),加尿样后,标本中HCG抗原(标准品)与硝酸纤维素膜的抗体特异结合,再加入胶体金标记的单克隆抗体(抗α-HCG),使其特异结合,完成对标本中抗原的染色。最后应用芯片扫描仪对光学信号的灰度值进行分析,从而绘制出标本中不同浓度的HCG对光学信号灰度值的标准曲线;结果与现有方法相比,该方法将检测的最低浓度降至25mIU/ml,具有良好的梯度、线性关系和重复性。结论该方法是一种快速、简便、有较强操作性的检测HCG的方法。
【关键词】免疫金染色;HCG;蛋白质芯片;双抗体夹心法;光学信号灰度。
Faulk和Taylor等[1]首次(1971年)将“胶体金标记”引入免疫化学创立了免疫金染色法(Immuno-GoldStainingIGS)。该标记物为纳米级金颗粒,具有良好的生物兼容性;金颗粒表面带有负电荷,因其静电的排斥力,故在水中能保持稳定,形成稳定的胶体[2]。该技术现已广泛应用于电镜、流式细胞仪、免疫印迹、蛋白染色、体外诊断试剂的制造等[3]。免疫金染色法具有与酶联免疫吸附试验(ELISA)相似的特异性和灵敏性,且快速简便,操作性强,检测结果可靠[4]。在当今的生物标记分析领域中,生命科学技术与与纳米技术的相互渗透与融合已fazhan发展为重要的前沿研究领域之一[5]。蛋白芯片将具有高度亲力和特异性的分子探针(例如单克隆抗体)点样在固相载体上,用于识别复杂样品(如血液、尿液等)中的目标多肽,再以胶体金标记的单克隆抗体(或者二抗)与样品中目标多抗特异结合后,D对信号的强度进行检测,从而判断样品中靶分子的数量。与传统的凝胶电泳、Westerb
lot及ELISA等相比,蛋白芯片更为快捷、高效、并行、高通量[6~9]。与其他已问世的、抗原检测抗体的蛋白芯片不同的是,本研究所涉及的蛋白芯片是通过抗体检测抗原,更为直接、客观和特异性高。
1材料与方法

(CD280,购于杭州隆基生物科技有限公司),HCG抗原(国家标准品的HCG,购于中国生物制品检定所),稀释用尿样(健康男性尿液),氯化钠(西安化学试剂厂),磷酸二氢钠(天津红岩化学试剂厂),磷酸氢钠(天津红岩化学试剂厂),吐温(TWeen20,西安化玻站试剂厂),氯金酸(上海试剂一厂),氯甲硅烷(西安化学试剂厂),氯仿(西安化学试剂厂),小牛血清白蛋白(),氢氧化钠(西安化学试剂厂),盐酸(西安化学试剂厂),去离子水(西安联尔科技有限公司)。
(WhatmanSchleicher&amp;Schuell公司Protran硝酸纤维素膜),芯片阅读仪(BA-,西安联尔科技有限公司),单点盒(西安联尔科技有限公司),垫料(普通用卫生纸)。

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