实验二GSTZ基因的PCR扩增.pptx

文档介绍：核酸的体外扩增真核细胞内DNA的复制聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)TheNobelPrizeinChemistry1993"forcontributionstothedevelopmentsofmethodswithinDNA-basedchemistry""forhisinventionofthepolymerasechainreaction(PCR)method",CA,USAB:1944一、PCR的基本原理:一种模拟天然DNA复制的体外扩增法PCR反应三部曲:变性(denature): 加热使双链DNA解开螺旋 ↓退火(annealing) 在退火温度条件下引物同模板杂交 ↓延伸(extend) 在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+ 和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物PCR反应体系DNA模板template引物primersdNTPs耐热聚合酶TaqDNApolymerase反应缓冲液reactionbufferMgCl2试剂原液浓度 工作浓度 50l体系PCR缓冲液 10 1 5L上游引物 10mol/L mol/L L下游引物 10mol/L mol/L LdNTPs 200mol/L 4LMgCl2 25mmol/L 3LDNA模板 ~10ngddH2O LTaq酶 1U/L L体系 LPCRPARAMETERPre-denature:94℃5minPCRCycles: Denature 94℃40secAnnealing 58℃35secExtend 72℃1min30secTotally35~40cyclesPost-extend: 72℃7minPCR反应体系DNA模板template引物primersdNTPs耐热聚合酶TaqDNApolymerase反应缓冲液reactionbufferMgCl2引物-人工合成的寡核苷酸