凝胶过滤层析纯化细胞色素C.ppt

文档介绍：实验七凝胶过滤层析纯化细胞色素C
一、目的要求
。

二、原理
凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
内水体积Vi
外水体积Vo
柱床体积Vt
洗脱体积Ve
Vt=Vo+Vi+Vg
Ve=Vo+KdVi
Kd=(Ve-Vo)/Vi
Kd=0
Kd=1
0<Kd<1
Kd>1
优点:
a. 条件温和 c. 损失少回收率高 d. 层析柱可反复使用
凝胶的类型:
Sephadex: 交联葡聚糖
Sepharose:琼脂糖凝胶 Bio-Gel A
Bio-Gel P:聚丙烯酰胺凝胶分子筛
Sephacryl:用N,N-亚甲双丙烯酰胺交联的葡聚糖凝胶
G-10
G-15
G-25
G-50
G-75
G-100
G-150
G-200
吸水量
(g/g干凝胶)








工作范围(肽与蛋白)D
<700
<1500
<5000
1500-20000
3000-70000
4000-150000
5000-300000
5000-500000
凝胶及柱的选择
凝胶的处理及装柱
凝胶干粉的溶胀(热溶胀)、浮选、抽气、装柱、蓝色葡聚糖检查、平衡
装柱时要注意操作压。
装柱的两种方法:

1/3床体积水→加入少许凝胶积起1-2厘米凝胶床→打开出水口→连续缓慢加入凝胶

(如图4-9)