文档介绍：第六章凝胶过滤
凝胶过滤是20C-60Y发展起来的一种分离纯化方法;又称分子筛层析、排阻层析
原理:凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,而大分子物质却被阻挡在外部,从而使混合溶液中各种组分按分子质量不同进行筛分
特点:设备简单,操作方便、重复性好、回收率高
用途:分离纯化蛋白质、核酸、多糖、激素等,测定蛋白质分子质量、样品的浓缩和脱盐等
目的
掌握凝胶的分类和性质
掌握凝胶过滤的基本原理
熟悉凝胶过滤的操作与应用
第一节凝胶的分类及性质
凝胶是一类不溶于水,但在水中有较大膨胀度和较好分子筛作用的化合物
目前主要有葡聚糖凝胶、天然琼脂糖和交联琼脂糖;其次,还有聚丙烯酰胺凝胶(生物胶)、交联葡聚糖与双丙烯酰胺共聚凝胶,以及交联琼脂糖与葡聚糖共价结合的凝胶等
商品名称:Sephadex,由葡聚糖[右旋糖酐(G型)]和3-氯-1,2环氧丙烷(交联剂)以醚键交联而成
在交联葡聚糖G-25、G-50中加入羟丙基后,即可构成烷基化(LH型)葡聚糖凝胶
一、葡聚糖凝胶
①性状:外观为白色珠状颗粒,在显微镜下可见表面为网状皱纹
②溶解性:带有大量的羟基,亲水性好,因此在水溶液或电解质溶液中极易膨胀
③型号:Sephadex G-n(n越大,则交联度越小,而膨胀度、吸水量和筛孔直径则越大
④应用:

凝胶过滤层析:以G型Sephadex为固定相,水为流动相,对水溶性物质进行分离
凝胶渗透层析:以LH型Sephadex为固定相,以有机溶剂为流动相,对脂溶性物质进行分离