文档介绍：营养与食品卫生学实验教程
营养与食品卫生学教研室
实习一蛋白质的测定
(微量凯氏定氮法)
一、原理
食物中的含氮有机物在浓H2SO4的作用下被消化(分解)生成(NH4)2SO4。当与NaOH作用即转变为NH3,通过蒸馏将NH3放出,收集于H3BO3溶液中。用已知浓度的HCl溶液滴定生成的(NH4)2B407,从而计算出氮量,再乘以蛋白质系数,即得蛋白质的含量。
CH2(NH2)DCOOH+H2SO4→CH2(NH2)OH+C02+SO2+H2O
CH2(NH2)OH+2H2S4→NH3+CO2+2S02+3H2O
2NH4+H2SO4→(NH4)2SO4
(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3+Na2SO4+2H2O
2NH3+4H3BO2→(NH4)2B4O7+5H2O
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O→2NH4Cl+4H3BO3
二、仪器
凯氏烧瓶(100ml) 微量凯氏定氮器
可控电炉蒸汽发生瓶
滴定管及架锥形瓶(50ml具塞)
吸管(1、2、5ml) 容量瓶(100tm)
量筒玻璃珠
三、试剂
(一)浓H2SO4(CP或AR) (二)10%CuSO4
(三)无水Na2SO4 (四)1%H3BO3
(五)50%NaOH(W/W):50gNaOH溶解于50ml蒸馏水中。
(六)甲基红一次甲基蓝混合指示剂:%%次甲基蓝水溶液等量混合即成。
(七):,加水至刻度用Na2CO3标定。
四、操作步骤
(一)样品称量:准确称取均匀样品200mg放入100ml凯氏烧瓶内。
(二)消化:
、10%CuSO4,溶液2ml及浓H2SO45ml,玻璃珠4粒。
,先用小火,时时转动凯氏烧瓶防止溶液起泡外溅,待样品中泡沫消失后即加大火,烧至溶液呈透明淡蓝色后再加热半小时,取下待冷。
,待冷后将样液转入100ml容量瓶内,用少量蒸馏水冲洗烧瓶数次,洗液并入容量瓶内,用蒸馏水稀释至刻度混匀得到样品稀释液。
(三)蒸馏:(蒸馏装置如图示)
%H3B03溶液10ml,加甲基红一次甲基蓝混合指示剂3滴,置于冷凝管下,使管口浸入溶液内。
,夹闭K2、K3、K4,煮沸发生瓶内液体。打开K4,吸取样品稀释液5ml经小漏斗注入反应室,用蒸馏水5ml冲洗,再小心加入50%NaOH lml,立即夹紧K4,并以水封口。
,夹紧K1开始蒸馏并记时。3分钟时移动接收瓶,使冷凝管口离开液面,再蒸馏1分钟,水洗冷凝管外口,移开接收瓶,立即加塞。
,打开Kl,夹闭K2,再打开K3,接通水泵吸出反应室之液体,再开K4加蒸馏水15ml至反应室抽洗,连续3次。
(四)滴定:,记录用量。按上述(二)一(四)步骤作一空白。
五、计算:蛋白质系数来源:一般混合膳食的蛋白质平均含氮16%,故从已知氮量求蛋白质量时应乘以系数100/16=(即蛋白质系数)。(%);-。
1NHCl lml 14mg氮
蛋白质8%=
式中:a——滴定样品时所用标准HCl的ml数。
b——滴定空白时所用标准HCl的ml数。
N——标准HCl的当量浓度。
C——蒸馏时吸取稀释消化液的ml数
W——称取样品重量(g)
六、注意事项
(一)消化应在通风柜内进行,且不能与滴定在同一房间。
(二)消化时应随时轻摇凯氏烧瓶,用消化液将附在管壁上的食物冲下,以保证完全消化。
(三)一定要在安置好NH3接收瓶后,才加液蒸馏,加NaOH时动作要快,以防NH3溢出。
(四)蒸馏过程火焰要稳定,不得中途停火,
(五)蒸馏及冲洗时各螺旋夹的开关顺序不得颠倒,以免发生意外。
实习二食物中还原型抗坏血酸测定
()
一、原理
利用抗坏血酸强的还原性质,—二氯酚靛酚,染料在碱性溶液中是蓝色,被还原后变为无色,滴定时,在酸性溶液中过量—滴即显红色,由此颜色变化指示反应终点,可求得食物中还原型抗坏血酸的含量。
反应方程式如下:
染料力价:即染料滴定度;指1毫升染料相当于(所能氧化)还原型维生素C的毫克数。
二、仪器
粗天秤组织捣碎机刻度吸管
切板菜刀蒸发皿
容量瓶量筒
烧