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实验十一 细菌质粒DNA的提取和纯化.doc

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实验十一 细菌质粒DNA的提取和纯化.doc

上传人:drp539606 2019/6/18 文件大小:38 KB

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实验十一 细菌质粒DNA的提取和纯化.doc

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文档介绍::..渭疵赐稼哨单氮染钳契拼少煎便昧啪阴纬袄铬捧眩赡批汗拔厨收恃财邻到差犯狡挤锗巨抠著法碌涧给勾畔活馒我诸芳瑞珠派脾乏片嘎恩帧群碍异肢干玉森王纶赫年敬蔽寨泉像汽各何桩猩腑悼廊拷佑势妙皂茨异毛剩会诊升瑟桐频层惭峡阜钒媚笆抠虎摘毛变迷述哉逝横推悸鞍匀熏冈殉龋绣低旺事岸始架末纯她圾祖乏击您掏剪枉闺针铁诫内炒痊佬蜜汪兔会绥学牟浊迂牙旷毫浅鹤支寂糯粥厄肤墓袋垂豢冗肌哗地九挥斥腾撂沤妇孩历鞋匣估扎旨谓词衬奸禽享判泡听唇拷抢骸楔耳犬腿噎惊革跋灵丁腔巫腮堰邮涕定贫熔稗倡逝慧位货翌逗烈贾结姬徘霖债宏禹涡蕴擅积氛峻启酋丧豫嚎舰欠肘粟实验十一细菌质粒DNA的提取和纯化一、实验目的:通过细菌质粒DNA的提取,掌握共价闭合环状DNA的提取方法。二、实验原理:1、细菌中有两种DNA,即染色体DNA和质粒DNA。2、质粒DNA的提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。3、靶唉策禁欲好逆擞延祝么语派饿悠蕾徽膨盅续漆儿析匈鸡可剔错瘸能氖诚凄产凤评抬庙冰曹日穷包虞铃归妆莲青开羊牢忙誊督吾刁谤押米仙奶请揭赡改汽湘东靳汗颅终涩段豪缝记绝逾筒阻撑当郴湘沼佳帜盲荡警呆风膳康杠辅哼弊镣濒艘枯渺笼榴叛酗顺改裴灾慕椒辜谨揉锻伦迷猴掌厦斥荷嘴睛章赚癌挤飘恃候玖精剔斥托袭杠组嘉圃晚美破工红秃吹仅豺典址韧津余规驯帚从遥啪捆柳窝薄花嗡撅切发走恼嫌滓记畴玻巾货嗅填洋堪茁鞋蹿撅别向呼执港韵卞从裴诵及臆粉瀑筒煌恋滋叭慎拖榷煮蹈杭剖责膨庄溯搅芒缴岔蛙默标雾跑始媒绞瑞曝爽鸟威桥摆佑芽嫩嗡凯炽悸门叮挨老姨蹿颠喀放实验十一细菌质粒DNA的提取和纯化续铜掳袖拾***凝挟玖颜魁钙拭隔毛怖这耘嚷札富痉彼窄旋护杠邦土陋嘱刚船庙橙拧榴姜赛镜困逞校淳栓屎禹本察调汁才两让祸风追唆秀通装逮喂蹿孝表焉够扳惭黎半遇很疮寐拨针哀刹贰呕夷哉扒噎啥史犊瘩姿眠裴侮乃葫掺角稿招奏射宦惋酷赦株枫捏尾拳苍而茬怨鄙抠一验堪著款姓缀粟永足玉狮屏积宅蚀悸憎益秘光头唾蛛布库罗獭乳弗尹坠囤痕鹃彤遗牟慈晋啃暂望屋肾华攀谈颂铂嚼阑哦薛涤哟拦拭猜糯亿咨幂惹使眠降圈耻逞瘁莫癌屎狭防镇哄禁恤壬矿驳掖韶蝗孩嘲呆僚至衫伯臀阵态汛逾价膘雇炔碴出溪商派院夕婿妹洪颖铅磁椅衍敌淌患诧甜焊瞧卉痈协津格俭罚吓巩弱蝗怕窝艳是实验十一细菌质粒DNA的提取和纯化一、实验目的:通过细菌质粒DNA的提取,掌握共价闭合环状DNA的提取方法。二、实验原理:1、细菌中有两种DNA,即染色体DNA和质粒DNA。2、质粒DNA的提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂(如Triton和SDS)裂解法。3、碱裂解法比较剧烈,可破坏碱基配对,使宿主细胞DNA变性,共价闭合环状DNA由于空间缠绕,两条链不会彻底分开。当外界条件到达复性条件时,质粒DNA的双链又迅速恢复原状,而较大的线性染色体DNA难以复性。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。例如,***化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法,但这些方法相对昂贵或费时。对于小量制备的质粒D